На страницах этого форума публикуются материалы предназначенные для ищущих новые пути в устранение проблем не решаемых современным обществом.
Форум не имеет целью популяризации чьих либо идей. Форум предназначен для понимания этих идей и ответа на важнейшие вопросы человеческого бытия.
Закон Вселенной - "прежде чем получить сначала отдай!" - ссылки видят зарегистрированные участники форума.

Экзополисахариды (exopolysaccharide)

Аюрведа и другие методики. Индивидуальный подбор питания.
Аватар пользователя
Ansaraides
Бывалый
Сообщений: 3441
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Город Святой Марии
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1098 раза
Поблагодарили: 2203 раза

Экзополисахариды (exopolysaccharide)

Сообщение Ansaraides » 07 сен 2016, 06:56

[греч. exo — вне, снаружи, poly — много, многое и sakcharon — сахар] — высокомолекулярные полимеры, состоящие из остатков сахара (см. Полисахариды), которые секретируются микроорганизмами в окружающую их среду. Они служат барьером между клетками и окружающей средой, являются резервуаром, выполняя протекторную роль против высушивания и предотвращая стрессы в экстремальных условиях; Э. выполняют роль саморегуляторов процессов роста и развития. Наиболее известный Э. — ксантан, который используется в качестве добавки, улучшающей качество самых различных продуктов, а также в разнообразных технологических операциях (повышение нефтедобычи, буровые работы, повышение урожайности, в пищевой, фармацевтической и косметической промышленностях и т. д.).

Полисахариды, находящиеся снаружи от клеточной стенки; по физическим свойствам экзополисахариды делятся на капсулы и слизи. Когда экзополисахариды относительно прочно связаны с клеточной стенкой, говорят о капсулах; если же связь непрочная, говорят о слизи (см. также декстран и леваны).
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимайте на значок пальца в верхнем правом углу и спи крепко.

Аватар пользователя
Ansaraides
Бывалый
Сообщений: 3441
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Город Святой Марии
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1098 раза
Поблагодарили: 2203 раза

Re: Экзополисахариды (exopolysaccharide)

Сообщение Ansaraides » 07 сен 2016, 06:59

Экзополисахариды - биологически-активное вещество пробиотических препаратов и влияние на него анитибиотиков


Проблема микроэкологии кишечника в последние годы привлекает большое внимание врачей. Применение пробиотиков приводит к увеличению числа молочнокислых бактерий, естественных обитателей кишечника. Исследователей привлекает разработка продуктов питания с использованием в качестве биодобавки живых культур микроорганизмов, так называемых пробиотических продуктов. Стратегия в создании этих продуктов направлена прежде всего на заполнение физиологической потребности организма человека в отдельных биологически активных веществах. Производительность процесса при производстве пробиотика определяется наибольшим выходом в конечном продукте жизнеспособных клеток бацилл и количеству биологически активных веществ, среди которых одними из важнейших являются экзополисахариды (ЭПС) - стимуляторы защитных реакций организма. Экзополисахариды бактерий рода Bacillus, особенно, которые культивируются в глубинных условиях, входящих в состав биопрепаратов (например, биоспорин) и могут в комплексе оказывать стимулирующие защитные реакции воздействия, наряду с антимикробным эффектом усиливает терапию вообще. Экзополисахариды также играют определенную роль в поддержании условий, благоприятных для продуцента. Они защищают клетки от фагоцитов, амебной инфекции и фагов, препятствует высушиванию клеток и денатурации белка. Некоторые экзополисахариды используются их продуцентами в качестве источника углерода.

Данная работа посвящена изучению влияния антибиотиков (различной концентрации) на секрецию микроорганизмами экзополисахаридов в культуральную жидкость. В качестве антибиотика был использован каномицин с концентрациями: Ск = 0 г / мл, С1 = 0,0007 г / мл, С2 = 0,002 г / мл, С3 = 0,006 г / мл. После инкубации на МПА суспензию культивировали глубинным путем на мясо-пептонном бульоне, 3 суток при 37оС и рН=7. По окончании культивирования биомассу определяли нефелометрическим путем на ФЭК - 56. Экзополисахариды выделяли из культуральной жидкости после отделения клеток с помощью фильтра, их осаждали 96% этиловым спиртом (Егорова, 1976).

В ходе опыта было обнаружено, что любые концентрации антибиотика подавляют рост биомассы и образование экзополисахаридов, при добавлении антибиотика в концентрации С3 = 0,006 г / мл вообще не образовалось биомассы, а соответственно и экзополисахаридов (рисунок).

ekzopolisaharidy[1].png
ekzopolisaharidy[1].png (10.47 KiB) 171 просмотра

Рисунок – Динамика выделения экзополисахаридов при добавлении антибиотика каномицина

Источник: Ляпустіна О. В. Екзополісахариди – біологічно-активна речовина пробіотичних препаратів та вплив на неї антибіотиків / О. В.Ляпустіна, І. М.Зубарева, І. С. Федорова // Биотехнология. Образование. Наука. Практика: сборник тезисов ІІІ Всеукраинской научно практической конференции с международным участием(Харьков, 18 – 20 октября 2006г.) – Харьков, 2006. – С. 119.
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимайте на значок пальца в верхнем правом углу и спи крепко.

Аватар пользователя
Ansaraides
Бывалый
Сообщений: 3441
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Город Святой Марии
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1098 раза
Поблагодарили: 2203 раза

Re: Экзополисахариды (exopolysaccharide)

Сообщение Ansaraides » 07 сен 2016, 08:35

ИЗУЧЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ ЭКЗОПОЛИСАХАРИДОВ МОЛОЧНОКИСЛЫМИ БАКТЕРИЯМИ
Девятайкина Е.Н., Змеева О. А.


В последние годы повысился интерес к вязким закваскам, вырабатывающим экзополисахариды, способные повышать вязкость и влагоудерживающую способность сгустка. Данные закваски в процессе ферментации образуют естественные загустители, которые могут заменить стабилизаторы растительного и животного происхождения.

Молочнокислые бактерии, образующие экзополисахариды, улучшают реологические свойства и текстуру ферментированных молочных продуктов.

Исходя из вышесказанного, представилось целесообразным исследовать образование экзополисахаридов молочнокислыми бактериями. Объектом исследования являлись молочнокислые бактерии Leuconoctoc mesenteroides и сливочный стрептококк Lactococcus lactis subsp. сremoris.

Для культивирования бактерий Leuconoctoc mesenteroides использовали среду с молочной сывороткой и сахарозой. Исследования показали, что на данной питательной среде молочнокислые бактерии Leuconostoc mesenteroides образуют значительное количество декстрана (16,83±0,12 г/л) на четвертые сутки культивирования.

Для культивирования сливочного стрептококка Lactococcus lactis subsp. сremoris использовали стерилизованное молоко и среду на основе осветленной молочной сыворотки. Обнаружено, что экзополисахариды бактерий Lactococcus lactis subsp. сremoris начинают образовываться с первых часов роста и их максимальное количество накапливается в среде в стационарную фазу роста и составляет 186±21 мг/л. Такое низкое количество экзополисахаридов сливочного стрептококка конечно несопоставимо с количеством декстрана, образуемого бактериями L. mesenteroides. В результате изучения органолептических и физико-химических свойств кисломолочного продукта, полученного в результате культивирования сливочного стрептококка на обезжиренном стерилизованном молоке, продукт характеризовался высоким качеством, а именно хорошими органолептическими свойствами, достаточно высокой вязкостью- 4,93+0,09 пуаз. Таким образом, показано, что даже такие низкие концентрации экзополисахаридов бактерий Lactococcus lactis subsp. сremoris оказывают существенное влияние на органолептические и реологические свойства продукта. При этом следует учитывать влияние этих полисахаридов на здоровье человека, а именно их противоопухолевое, холестеринпонижающее, иммуномодулирующее и пробиотическое действие.

Отправлено спустя 3 минуты 49 секунды:
ОБ АКТУАЛЬНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ БИОПРОДУКТОВ ДЛЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО ПИТАНИЯ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ, СИНТЕЗИРУЮЩИХ ЭКЗОПОЛИСАХАРИДЫ

Артюхова С.И. 1 Моторная Е.В. 1
1 Омский государственный технический университет

Одним из перспективных направлений пищевой биотехнологии является использование молочнокислых бактерий, синтезирующих экзополисахариды (ЭПС) в технологии производства биопродуктов для функционального питания. Особый интерес к ЭПС-синтезирующим микроорганизмам обусловлен тем, что на Международном уровне молочнокислым бактериям, которые используются in situ, присвоен статус безопасности – GRAS, что подтверждает возможности применения этих микроорганизмов в производстве безопасных продуктов питания. ЭПС молочнокислых бактерий могут придавать пище функциональные свойства и полезное оздоровительное воздействие. Это направление особенно перспективно в связи задачей обеспечения населения необходимым количеством биологически полноценных, натуральных, экологически чистых пищевых продуктов, отвечающих современным требованиям науки о питания [1, 2].

В настоящее время качество и безопасность пищевых биопродуктов является одним из основных условий сохранения здоровья населения России. При производстве биопродуктов в промышленности существует проблема предотвращения инфицирования бактериофагами стартовых культур молочнокислых бактерий, которые используются на биопредприятиях. Согласно литературным данным, экзополимерная капсула штаммов молочнокислых бактерий является фактором, участвующим в механизме резистентности клетки к адгезии фаговых частиц, выполняя защитную функцию клетки от лизиса бактериофагов. Следовательно, используя ЭПС-штаммы молочнокислых бактерий можно повысить устойчивость стартовых культур к бактериофагам.

Существует мнение различных ученых о том, что ЭПС-штаммы молочнокислых бактерий обладают повышенной устойчивостью к агрессивной среде благодаря наличию экзополисахаридной капсулы, которая, вероятно служит связующим звеном при их заселении и адгезии в кишечнике. Таким образом, это свойство повышает вероятность накопления таких штаммов молочнокислых бактерий в пищеварительном тракте человека.

Полисахариды способны проявлять такие лечебно-профилактические свойства, как противоязвенная активность, снижать содержание холестерола в крови, выступать в качестве активных антагонистов против раковых клеток, способствовать снижению давления при гипертонии. Экзополисахариды, продуцируемые молочнокислыми бактериями, интенсифицируют процесс ферментации молока, сокращая время образования сгустка, улучшают реологические свойства и текстуру ферментированных молочных биопродуктов, а также стимулируют рост самих бактерий и синтез ими других полезных метаболитов (аминокислот, летучих жирных кислот, витаминов). ЭПС выполняют функции саморегуляторов процессов роста и размножения микроорганизмов, служат барьером между клетками и окружающей средой, обеспечивают адаптацию в различных экстремальных условиях, защищают клетки от фагов, препятствуют высушиванию клеток, повреждениям при заморозке и денатурации белка, а некоторые ЭПС используются их продуцентами и в качестве источника углерода.

Биопродукты на основе микробных консорциумов обладают большей устойчивостью к неблагоприятным факторам среды и более высокой биохимической активностью по сравнению с заквасками, приготовленными с использованием чистых культур. Поэтому актуальным и целесообразным является получение биопродуктов на основе микробных консорциумов отечественных штаммов молочнокислых бактерий, синтезирующих ЭПС, внесение которых будет способствовать наибольшему сохранению полезных природных свойств получаемых биопродуктов, их конкурентоспособности при заданных показателях качества и безопасности.
Библиографическая ссылка
Артюхова С.И., Моторная Е.В. ОБ АКТУАЛЬНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ БИОПРОДУКТОВ ДЛЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО ПИТАНИЯ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ, СИНТЕЗИРУЮЩИХ ЭКЗОПОЛИСАХАРИДЫ // Международный журнал экспериментального образования. – 2015. – № 5-1. – С. 76-76;
URL: Для просмотра ссылок Вы должны быть авторизованы на форуме. (дата обращения: 07.09.2016).
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимайте на значок пальца в верхнем правом углу и спи крепко.

Аватар пользователя
Ansaraides
Бывалый
Сообщений: 3441
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Город Святой Марии
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1098 раза
Поблагодарили: 2203 раза

Re: Экзополисахариды (exopolysaccharide)

Сообщение Ansaraides » 07 сен 2016, 08:42

Экзополисахариды молочнокислых бактерий и их функциональная значимость в организме животных


Среди многочисленных веществ - метаболитов бактерий особое место занимают углеводы и их производные, которые в виде разнообразных производных комплексов входят в состав живых клеток, выполняя роль источника энергии, регуляторов специфических биохимических процессов.

Источником получения экзополисахаридов (ЭПС) на сегодняшний день являются многие микроорганизмы. К наиболее известным микроорганизмам, которые способны продуцировать ЭПС, относятся бактерии разных родов. Среди них значительное место занимают молочнокислые бактерии.

Изучение ЭПС, продуцируемые молочнокислыми бактериями, началось с 80-х годов прошлого столетия и активно развивается в настоящее время, отражением чего служат постоянно публикуемые обзоры (Sandford, Cottrell, Pettitt, 1984; Degeest, Van-ingelgem, Vuyst, 2001; Bergmaier, Champagne, Lacroix, 2003; Champagne, Gardner, Lacroix, 2007 и др.).

Среди молочнокислых бактерий особое внимание уделяется бактериям рода Lactobacillus, представители которого широко распространены в природе. Разными исследователями показано, что лактобацилльг обладают большим потенциалом в отношении синтеза экзополисахаридов (van den Berg et al., 1995; Gasscm, Schmidt, Frank, 1995; Macedo et al., 2002 и др.), однако функции этих биополимеров являются не до конца изученными. Для формирования представления о влиянии ЭПС молочнокислых бактерий на физиологические реакции в организме животных, необходимо накопление данных о химической структуре, физических и биологических свойствах ЭПС разных видов и штаммов.

В связи с этим исследования, посвященные изучению функций экзополисахаридов молочнокислых бактерий рода Lactobacillus различных штаммов, являются актуальными и могут иметь значительный научный интерес и прикладное значение.

Цель работы состояла в выделении ЭПС из Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii subsp. delbrueckii B-1596, изучении их основных физико-химических свойств и влиянии их на содержание ци-токинов в организме животных в норме и при стафилококковой инфекции.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Подобрать оптимальные условия культивирования L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii subsp. delbrueckii B-1596 (состав питательной среды, температура, рН, время культивирования) для обеспечения максимального продуцирования ими экзополисахаридов в лабораторных условиях.

2. Выделить и очистить экзополисахариды L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii subsp. delbrueckii B-1596 из культуралыгой жидкости.

3. Определить молекулярную массу, химическую природу, моносахаридный состав и вязкость полученных экзополисахаридов L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii subsp. delbrueckii B-1596.

4. Изучить влияние in vivo экзополисахаридов L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii subsp. delbrueckii B-1596 на содержание ци-токинов в сыворотке крови экспериментальных животных.

5. Оценить цитокиновый статус организма экспериментальных животных при моделировании стафилококковой инфекции на фоне действия ЭПС L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii subsp. delbrueckii B-1596.

Научная новизна

Впервые выделены ЭПС L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. delbrueckii B-1936, L. delbrueckii subsp. delbrueckii B-1596 и определены их молекулярные массы, химическая природа, моносахаридный состав и вязкость. Показано, что L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii subsp. delbrueckii B-1596 максимально продуцируют экзополисахариды на среде A.Welman с соавт. (2003) в нашей модификации при 38°С, рН 5,5 на 44-46 ч культивирования.

Обнаружено, что введение ЭПС L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii subsp. delbrueckii B-1596 в организм лабораторных мышей оказывает неоднозначное влияние на содержание цитокинов: ИЛ-1а, ФНО-а, ИФ-у, ИЛ-4 в сыворотке крови. Показана возможность коррекции цитокинового статуса организма лабораторных мышей путем введения им ЭПС L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii subsp. delbrueckii B-1596 при стафилококковой инфекции.

Практическая значимость работы


Способность экзополисахаридов Ь. (1е1ЬгиескИ вэр. Ьи^апсиз, I. с1е1ЬгиескИ В-1936 и Ь. МЬгиескИ зиЬэр. йе1ЪгиесШ В-1596 регулировать содержание некоторых провоспалительных и регуляторных цитокинов в организме животных открывает перспективы использования их в качестве профилактических иммуномодулирующих препаратов и для коррекции цитокинового статуса при инфекционных заболеваниях.

По материалам диссертационной работы опубликованы «Методические рекомендации по выделению и очистке экзополисахаридов бактериального происхождения» (в соавторстве с Г.Е. Рысмухамбетовой, Е.Н. Бухаровой, Д.А. Жемеричкиным, Л.В. Карпуниной) для студентов старших курсов, аспирантов, специалистов микробиологических, биотехнологических лабораторий, рекомендованные Учебно-методической комиссией и одобренные Ученым советом факультета ветеринарной медицины и биотехнологии Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова (протокол № 58 от 23 июня 2009 г). Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций по микробиологии, биотехнологии, проведении лабораторно-практических занятий и написании дипломных работ в Саратовском государственном аграрном университете им. Н.И. Вавилова

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Выделенные из культуральной жидкости ЭПС I. <1е1Ъгиески .чБр. Ьи^агкш, Ь. йе1Ьгиески В-1936 и Ь. ¿г1Ьгиески виЬзр. <1е1Ъгиескп В-1596 представлены одной нейтральной фракцией с молекулярными массами 140 кДа, 220 кДа, 1700 кДа соответственно и характеризуются сходным моносахаридным составом, однако обладают разной относительной вязкостью.

2. Оптимальными условиями культивирования для наибольшей продукции экзополисахаридов для £. с1е1ЬгиескИ 5вр. Ьи^аг1сих, Ь. с1е1ЬгиескИ В-1936 и йе1Ьгиеска 5иЬ$р. ¿еШгиескИ В-1596 являются: 38 °С, рН 5,5, время культивирования 44-46 ч на модифицированной питательной среде Л.\¥е1ш;ш с соавт. (2003).

3. ЭПС Ь. с!е1Ьгиески ЗБр. Ьи^апсиз, с1е1Ьгиески В-1936 и /„. Ле1Ъгигски эиЬзр. с1е1ЬгиескП В-1596 оказывают влияние на цитокиновый статус организма экспериментальных животных в норме и при стафилококковой инфекции.

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова».

Апробация работы:

Материалы диссертации были представлены на: II-Открытой Всероссийской конференции «Молодежь и наука XXI века» (Россия, Ульяновск, 2007); региональной конференции молодых ученых «Вавиловские чтения - 2007» (Россия, Саратов, 2007); Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 90-летию факультета (института) ветеринарной медицины (Россия, Саратов 2009); XIII Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Россия, Санкт-Петербург, 2009).

Выводы

1. Подобраны оптимальные условия культивирования для I. <1е1Ьгиескп вБр. Ьи^апсиз, Ь. с1е1Ьгиески В-1936 и с1е1Ьгигскп б-иЬзр. с1е1Ьгиески В-1596 (среда А.\¥е1тап с соавт. (2003) в нашей модификации, 38°С, рН 5,5 время культивирования 44-46 ч культивирования) для обеспечения максимального продуцирования ими экзо-полисахаридов в лабораторных условиях.

2. Впервые выделены экзополисахариды Ь. (1е1Ьгиески ээр. Ьи^апсия, Ь. с1е1ЬгиескИ В-1936 и Ь. с1е1Ьгиески эиЬвр. <1е1ЪгиескИ В-1596 из культуральной жидкости. Усовершенствован метод получения ЭПС, который позволяет получать хрома-тографически чистые препараты.

Рис. 18. Влияние лаксараков на содержание ИЛ-4 в сыворотке крови экспериментальных животных при стафилококковой инфекции Примечание: ! - контроль, 2 - S. aureus 209-Р, 3-5. aureus 209-Р + лаксаран Z, 4 -S. aureus 209-Р + лаксаран 1936, 5 -S. aureus 209-Р + лаксаран 1596.

3. Установлено, что ЭПС L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii subsp. delbrueckii B-1596 представляют собой нейтральные вещества с молекулярными массами 140, 220, 1700 кДа соответственно, обладают сходным мо-носахаридным составом, но различаются относительной вязкостью.

4. Показано, что ЭПС L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii subsp. delbrueckii B-1596 оказывают влияние на щггокиновый статус организма экспериментальных животных (мышей) в норме и при стафилококковой инфекции.

Список работ, опубликованных по теме диссертации


1.Полукаров, Е.В. Выделение и очистка экзополисахаридов из молочнокислых бактерий / Е.В. Полукаров, Д.А. Жемеричкин, Л.В. Карпунина // Молодежь и наука XXI века: Материалы II-Открытой Всероссийской конференции, 24-26 апреля 2007. - Ульяновск, 2007. - С. 64.

2. Полукаров, Е.В. Оптимизация процесса получения экзополисахаридов лактобацилп / Е.В. Полукаров, Л.В. Карпунина, Е.Н. Бухарова // Вавиловские чтения - 2007: Материалы конференции, посвященной 120-й годовщине со дня рождения академика Н.И. Вавилова, 26 - 30 ноября, 2007. - Саратов, 2007. - С. 334.

3. Полукаров, Е.В. Оптимизация условий культивирования Lactobacillus bulgaricus для продуцирования экзополисахаридов / Л.В. Карпунина, Е.В. Полукаров, А.В. Нур-мухамедов // Материалы конференции по итогам научно - исследовательской и производственной работы студентов за 2007 г., 7-11 апреля, 2008. - Саратов, 2008. - С. 8-9.

4. Полукаров, Е.В. Выделение экзополисахаридов Lactobacillus delbrueckii spp. bulgaricus при различных условиях культивирования / Е.В. Полукаров, Л.В. Карпунина, Д.А. Жемеричкин // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова - 2009. - №. 4.-С. 20-23.

5. Полукаров Е.В. Влияние лаксарана Z на цитокиновый статус мышей при моделировании стафилококковой инфекции / Е.А. Горельникова, Е.В. Полукаров, Л.В. Карпунина // Сборник материалов всероссийской научно-практической конференции 2-6 февраля 2009 года, посвященной 90-летию факультета (института) ветеринарной медицины. - Саратов, 2009. - С. 41-43.

6. Полукаров Е.В. Влияние экзополисахаридов Lactobacillus delbrueckii spp. bulgaricus на цитокиновый статус лабораторных мышей / Е.А. Горельникова, Е.В. Полукаров, Л.В. Карпунина, Е.И. Тихомирова // Медицинская иммунология. - 2009. - Т. 11, № 4-5.-С. 309-310.

Диплом, курсовая и реферат самостоятельно — Реферун: Для просмотра ссылок Вы должны быть авторизованы на форуме.
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимайте на значок пальца в верхнем правом углу и спи крепко.

Аватар пользователя
Ansaraides
Бывалый
Сообщений: 3441
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Город Святой Марии
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1098 раза
Поблагодарили: 2203 раза

Re: Экзополисахариды (exopolysaccharide)

Сообщение Ansaraides » 07 сен 2016, 08:45

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТОКСИЧНОСТИ ЭКЗОПОЛИСАХАРИДОВ НЕКОТОРЫХ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ БИОПРОБОЙ НА ИНФУЗОРИИ КОЛПОДЫ

Правдивцева М.И., Карпунина Л.В., Полукаров Е.В.

В последнее время большое внимание уделяется полисахаридам, полученными микробиологическим путем и изучению их физико-химических, биологических свойств, токсичности.

Целью работы явилось определение токсичности экзополисахаридов (ЭПС) молочнокислых бактерий: лаксарана 1596 из Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus 1596 и 1936 из L.delbrueckii 1936, а также лаксарана Z, полученного из болгарских палочек (ГУП ПЭЗ РАСХН, г. Москва). Культуры L. delbrueckii ssp. bulgaricus 1596 и L.delbrueckii 1936 были получены из Всероссийской Коллекции Микроорганизмов (г. Пущино, Московская область, Россия).

Исследование токсичности бактериальных экзополисахаридов проводили с использованием инфузорий колподы (Colpoda steinii) по общепринятой методике определения токсичности с использованием простейших в качестве тест-объекта.

В процессе исследований было показано, что бактериальные ЭПС (0,05%) оказывают различное действие на инфузории. Наблюдение за инфузориями проводили визуально с использонием микроскопа в течение 30 минут.

В контрольной пробе наблюдали характерное для инфузорий хаотичное движение. В присутствии лаксарана Z движение колподы было более медленным, чем в контроле. В то время как лаксаран 1936 способствовал более активному движению инфузорий по сравнению с контрольной пробой. Аналогичное воздействие на инфузории оказывал и лаксаран 1596. Во всех пробах с бактериальными ЭПС форма и внешний вид инфузорий не изменились, колподы были такие же, как и в контроле.

Таким образом, согласно использованному стандарту, можно сделать вывод, что исследуемые ЭПС, выделенные из молочнокислых бактерий, были не токсичны, так как гибели Colpoda steinii не происходило, и все они сохраняли подвижность.
Библиографическая ссылка
Правдивцева М.И., Карпунина Л.В., Полукаров Е.В. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТОКСИЧНОСТИ ЭКЗОПОЛИСАХАРИДОВ НЕКОТОРЫХ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ БИОПРОБОЙ НА ИНФУЗОРИИ КОЛПОДЫ // Фундаментальные исследования. – 2008. – № 12. – С. 43-43;
URL: Для просмотра ссылок Вы должны быть авторизованы на форуме. (дата обращения: 07.09.2016)
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимайте на значок пальца в верхнем правом углу и спи крепко.

Аватар пользователя
Ansaraides
Бывалый
Сообщений: 3441
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Город Святой Марии
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1098 раза
Поблагодарили: 2203 раза

Re: Экзополисахариды (exopolysaccharide)

Сообщение Ansaraides » 07 сен 2016, 08:56

Разработка новых видов продуктов функционального питания

Проект, изменивший мир - биотехнологии и медицина
Автор проекта
Шестаков Андрей

[youtube]lf9jDXokg7c[/youtube]

Пробиотики - живые микроорганизмы, которые при применении в адекватных количествах вызывают улучшение здоровья организма-хозяина (формулировка ВОЗ). Пробиотики широко используются в пищевых добавках и продуктах питания, в том числе йогуртах и других кисломолочных продуктах. Микроорганизмы, входящие в состав пробиотиков не патогенны, не токсигенны, не аллергенны, сохраняют жизнеспособность при хранении. Разрешения на производство и применение пробиотиков в качестве диетических добавок от государственных структур, контролирующих разработку и производство лекарственных препаратов, не требуется (в США - Food and Drug Administration: FDA, в России - Фармакологический комитет и Комитет медицинских и иммунобиологических препаратов МЗ РФ). Эффективность пробиотиков зависит от многих факторов: их состава, состояния микробиоты организма человека, образа жизни и др. Наиболее часто назначаемыми и изученными являются пробиотики, изготовленные на основе бифидо-, лактобактерий и энтерококков. Для микроорганизмов, принимаемых перорально, желудок с соляной кислотой и пепсином не является непреодолимым барьером. Лактобактерии могут почти беспрепятственно попадать в толстый кишечник и быть обнаруженными в стуле. Из перорально принятых микроорганизмов (бифидо- и лактобактерии) сквозь весь пищеварительный тракт проходит около 40%. Употребление микробиологических препаратов во время еды повышает выживаемость бактерий, поскольку продукты питания играют роль буфера. Дополнительно химус создает благоприятные ниши для их существования в желудке и тонком кишечнике. После приема, в среднем, бактерии обнаруживаются в стуле от одной до трех недель. Чтобы добиться терапевтического эффекта от применения молочнокислых бактерий, они должны приниматься непрерывно в течение длительного времени.

Целью проекта является разработка продуктов функционального питания, содержащих пробиотические микроорганизмы.

В рамках данной работы был проведен мониторинг существующей коллекции микроорганизмов, а так же скрининг природных экологических ниш с целью оценки потенциально пробиотических микроорганизмов, обладающих высокой продукцией экзополисахаридов при культивировании. В ряде работ было показано, что экзополисахариды молочнокислых бактерий способны регулировать содержание некоторых провоспалительных и регуляторных цитокинов в организме человека, что позволяет использовать их в качестве профилактических иммуномодулирующих факторов, а так же для коррекции цитокинового статуса при некоторых инфекционных заболеваниях.

Разрабатываемые пробиотические продукты являются как самостоятельными продуктами функционального питания, так и входит в состав других продуктов (кисломолочные продукты, хлебобулочные изделия, мясные и кондитерские изделия) в качестве пробиотического премикса.

Так же в работе используется среда культивирования на основе молока, что позволяет вырабатывать сухую биомассу микроорганизмов с высокой пробиотической активностью при минимальных затратах технологического цикла, что позволит значительно снизить себестоимость выпускаемой продукции.


Практическая значимость


Разработка пробиотических продуктов на основе штаммов – продуцентов экзополисахаридов позволит обогатить пищевой рацион человека факторами, позитивно влияющими на иммунную систему. Вместе с тем использование микроорганизмов с доказанными нетоксигенными свойствами позволит мягко корректировать иммунный статус.

Данный проект имеет все условия для успешной реализации, что позволит вывести на рынок новый вид пробиотических продуктов и как следствие решить проблему профилактики и лечения многих социально-значимых заболеваний.

Для просмотра ссылок Вы должны быть авторизованы на форуме.
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимайте на значок пальца в верхнем правом углу и спи крепко.

Аватар пользователя
Ansaraides
Бывалый
Сообщений: 3441
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Город Святой Марии
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1098 раза
Поблагодарили: 2203 раза

Re: Экзополисахариды (exopolysaccharide)

Сообщение Ansaraides » 08 сен 2016, 06:27

ЭКЗОПОЛИСАХАРИДЫ – БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ПРОБИОТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ И ЗАКВАСОК

exo.jpg

ЧТО ТАКОЕ ЭКЗОПОЛИСАХАРИДЫ?

Еще одним из важнейших продуктов метаболизма пробиотических микроорганизмов являются т.н. экзополисахариды. Следует отметить, что микробные экзополисахариды (ЭПС), то есть полисахариды, экскретируемые в среду, продуцируются значительным количеством бактерий и грибов.

Экзополисахариды (exopolysaccharide) [греч. exo — вне, снаружи, poly — много, многое и sakcharon — сахар] — высокомолекулярные полимеры, состоящие из остатков сахара (см. Полисахариды), которые секретируются микроорганизмами в окружающую их среду.

Из других разделов сайта можно уже сделать небольшой вывод о значении экзополисахаридов, как для самих бактерий, их продуцирующих, так и для потребностей человека, в частности, в пищевых производствах. Именно они играют роль натуральных природных загустителей в технологиях получения кисломолочных биопродуктов, а также выполняют функции саморегуляторов процессов роста и размножения микроорганизмов.

Однако следует особо подчеркунуть, что экзополисахариды (ЭПС) не только улучшают реологические свойства кисломолочных продуктов, но также выступают в роли факторов, способствующих адгезии полезных микроорганизмов на стенках кишечника, чем обеспечивают максимальную эффективность пробиотического воздествия на организм хозяина, а также обеспечивают колонизационную резистентность. Напомним, что Колонизационная резистентность (КР) представляет собой совокупность факторов местного иммунитета и антагонистических свойств нормальной микрофлоры организма, предотвращающих колонизацию слизистых оболочек патогенными микроорганизмами.
ЭКЗОПОЛИСАХАРИДЫ И ПРЕПАРАТЫ ПРОБИОТИКИ

Проблема микроэкологии кишечника в последние годы привлекает большое внимание врачей. Применение пробиотиков приводит к увеличению числа молочнокислых бактерий, естественных обитателей кишечника. Исследователей привлекает разработка продуктов питания с использованием в качестве биодобавки живых культур микроорганизмов, так называемых пробиотических продуктов. Стратегия в создании этих продуктов направлена прежде всего на заполнение физиологической потребности организма человека в отдельных биологически активных веществах.

Производительность процесса при производстве препарата - пробиотика определяется наибольшим выходом в конечном продукте жизнеспособных клеток полезных микроорганизмов и количеством биологически активных веществ, среди которых одними из важнейших являются экзополисахариды (ЭПС) - стимуляторы защитных реакций организма. Экзополисахариды бактерий, особенно, которые культивируются в глубинных условиях, входящих в состав биопрепаратов и могут в комплексе оказывать стимулирующие реакции защитного воздействия, наряду с антимикробным эффектом усиливают терапию вообще.

экзополисахариды выполняют защитную роль, а также роль природных загустителей Экзополисахариды также играют определенную роль в поддержании условий, благоприятных для их продуцентов, т.е. самих бактерий. ЭПС защищают клетки от фагоцитов, амебной инфекции и фагов, препятствуют высушиванию клеток (в т.ч. повреждениям при заморозке) и денатурации белка. Некоторые экзополисахариды используются их продуцентами и в качестве источника углерода.

Спектр положительного воздействия ЭПС на организм человека очень широк и продолжает изучаться, но уже сегодня очевидно, что за использованием данных биологически активных веществ микробного происхождения в здравоохранительной практике имеется огромное будущее.

ЭКЗОПОЛИСАХАРИДЫ И ЗАКВАСКИ
1711752821_6[1].jpg
1711752821_6[1].jpg (28.3 KiB) 172 просмотра

Закваска ПРОПИОНИКСВ последние годы повысился интерес к т.н. вязким закваскам, вырабатывающим экзополисахариды, способные повышать вязкость и влагоудерживающую способность сгустка. Данные закваски в процессе ферментации образуют естественные загустители, которые могут заменить стабилизаторы растительного и животного происхождения. Следует отметить, что экзополисахариды в таких заквасках служат барьером между клетками и окружающей средой, являются резервуаром, выполняя протекторную (защитную) роль против высушивания (обезвоживания) и замораживания, обеспечивают защиту от низких значений рН и др. стрессов, а также адаптацию в иных экстремальных условиях). Именно эти свойства во многом и позволяют создавать наши, т.н. глубокозамороженные закваски, а также закваски лиофилизированные (сухие), с высокой биохимической активностью (с высоким количеством жизнеспособных клеток пробиотических микроорганизмов). Отметим, что бактерии заквасочных (пробиотических) культур, образующие экзополисахариды, улучшают реологические свойства и текстуру ферментированных молочных продуктов. Более того, экзополисахариды, продуцируемые микроорганизмами, интенсифицируют процесс ферментации молока, сокращая время образования сгустка (геля), а также стимулируют рост самих бактерий и синтезирование ими др. полезных метаболитов (аминокислот, летучих жирных кислот, витаминов).

ОБОБЩЕННЫЕ СВЕДЕНИЯ О СВОЙСТВАХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЭКЗОПОЛИСАХАРИДОВ:

    Экзополисахариды стимулируют рост некоторых молочнокислых бактерий и подавляют количество энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике в условиях иммобилизационного, холодового, этанолового стрессов;
    Экзополисахариды стимулируют фагоцитарную активность макрофагов и влияют на продукцию основных провоспалительных цитокинов перитонеальными и альвеолярными макрофагами, способствуя активации факторов естественной резистентности (проще говоря укрепляют иммунный статус организма);
    Экзополисахариды приводят к более быстрому заживлению ранений резаного типа; проявляют in vitro антимикробную активность в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры;
    Экзополисахариды при добавлении в рецептуру сыровяленых колбас улучшают их структурно-механические, физико-химические, микробиологические и органолептические свойства;
    Экзополисахариды выполняют роль естественных загустителей и стабилизаторов консистенции кисломолочных биопродуктов на пробиотических заквасках. В состав экзополисахаридов входят остатки нейтральных молекул глюкозы, ксилозы, галактозы, диокситалозы, уроновых кислот, а также ряд неидентифицированных пентоз и гексоз;
    Установлено, что экзополисахариды, образуемые заквасочными (пробиотическими) микроорганизмами, увеличивают количество полезных бактерий и стимулируют продукцию их метаболитов, а также повышают активность ферментации пищевых сред. Показано, что при совместном культивировании экзополисахариды, синтезируемые пропионовокислыми бактериями, стимулируют рост бифидобактерий.
на заметку…
СФЕРЫ ПРИМЕНЕНИЯ ПОЛИСАХАРИДОВ МИКРОБНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ
sfera.jpg

Сфера применения полисахаридов определяется с учетом их свойств

Итак, полисахариды, находящиеся снаружи от клеточной стенки, называют экзополисахаридами. По физическим свойствам различают капсулы и слизи. Когда экзополисахариды относительно прочно связаны с клеточной стенкой, говорят о капсулах; если же связь непрочная или ее вообще нет, говорят о слизи.

С помощью микроорганизмов (бактерий, грибов) можно получать разнообразные полисахариды, ферменты, антигены и яды. Сегодня продукты микробного происхождения все чаще заменяют вещества, получаемые классическим способом. Сфера применения полисахаридов определяется с учетом их свойств, как функцио­нальных - способность растворяться в воде, создавать высоковязкие растворы, студ­ни, гели, так и биологических. Для повышения вязкости жидкостей уже с давних времен применяются растительные слизи. Но в настоящее время их все больше вытесняют многочисленные бактериальные экзополисахариды (см. табл. 1). В качестве добавок к мороженому, пудингам и кремам используют алгинаты. Они же нашли применение и как гидрофильные покрытия для поддержания корней растений во влажном состоянии. По­лисахариды, добываемые из морских водорослей, постепенно вытесняются сходными продуктами, получаемыми с помощью Azotobacter или Pseudomonas.

Разностороннее применение нашли слизи, образуемые фитопатогенной бактерией Xanthomonas campestris, - ксантаны. Ксантаны применяются как наполнители в пищевой и косметической промышленности, как эмульгаторы для типографских красок и даже в качестве добавок к промывным водам в месторождениях нефти. Для приготовления пудингов и низкокалорийных супов используют курдланы, которые не подвергаются расщеплению в кишечнике человека.

В заключение, отдавая дань направлению деятельности нашей компании, еще раз подчеркнем, что одним из наиболее перспективных направлений использования полисахаридов является применение их в пищевой промышленности, например для производства СМЕТАНЫ, где экзополисахариды выполняют роль естественных загустителей и стабилизаторов консистенции. Также актуально использование экзополисахаридов в ХЛЕБОПЕЧЕНИИ. Самый распространенный дефект пшеничной муки - пониженное содержание в ней клейковины. Существующие ныне способы повышения качества такой муки трудоемки и экономически невыгодны. Эффективным способом повышения качества хлеба из низкоклейковинной муки является использование в качестве улучшителей гидрофильных добавок различного происхождения, в том числе микробных полисахаридов.

Отправлено спустя 20 часа 31 минуты 42 секунды:
EPS11.JPG
EPS11.JPG (46.11 KiB) 155 просмотра

63283909.jpg
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимайте на значок пальца в верхнем правом углу и спи крепко.

Аватар пользователя
Ansaraides
Бывалый
Сообщений: 3441
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Город Святой Марии
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1098 раза
Поблагодарили: 2203 раза

Re: Экзополисахариды (exopolysaccharide)

Сообщение Ansaraides » 12 сен 2016, 12:24

Полисахариды усвоение организмом
    При гидролизе многоосновных солей образуются кислые соли. Гидролиз солей — один из основных видов гидролиза вещества. В более широком смысле слова под гидролизом понимают реакции обменного разложения между веществами и водой. Усвоение сложных питательных веществ живыми организмами начинается всегда с процесса гидролиза жиров, белков, полисахаридов и других органических веществ. [c.20]

    Характерной особенностью ферментов является их четко выраженная специфичность действия. Есть ферменты, гидролитически расщепляющие жиры (липазы), другие (протеазы) расщепляют белки, третьи (карбогидразы) — углеводы. Имеется несколько видов ферментов, способствующих отщеплению водорода (дегидразы) есть и особые окисляющие ферменты (оксидазы). В каждой из этих групп имеются ферменты с еще более узкой специфичностью действия. Так, например, одни из карбогидраз расщепляют лишь полисахариды, но не расщепляют тетра-, три-и дисахаридов для этого служат уже другие ферменты. Среди последних имеются ферменты, расщепляющие только дисахариды с а-глюкозидной группировкой другие же ферменты способствуют расщеплению р-глюкозидов. На действии таких ферментов и основано различие в усвоении животными организмами клетчатки (стр. 318) и крахмала (стр. 320). Дифференцированной специфичностью отличаются и отде.пьные липазы, протеазы и другие ферменты. [c.388]

    Вопрос о физиологической роли минеральных элементов в живой клетке и организме в целом широко изучается в последнее время. Современная литература содержит много работ, свидетельствуюш их о тесной связи условий внешней среды, особенно ее химического состава, и физиолого-биохимических свойств клеток. Известно, что минеральные элементы влияют на ход ферментативных реакций в клетках, обмен различных соединений и формообразовательные процессы. Усвоение минеральных элементов связано с образованием основных клеточных компонентов — нуклеиновых кислот и белков, а также полисахаридов и липидов. [c.52]
Для просмотра ссылок Вы должны быть авторизованы на форуме.
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимайте на значок пальца в верхнем правом углу и спи крепко.

Аватар пользователя
Ansaraides
Бывалый
Сообщений: 3441
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Город Святой Марии
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1098 раза
Поблагодарили: 2203 раза

Re: Экзополисахариды (exopolysaccharide)

Сообщение Ansaraides » 22 сен 2016, 12:42

СОСТАВ И ИММУНОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКЗОПОЛИСАХАРИДОВ РИЗОБАКТЕРИЙ PAENIBACILLUS POLYMYXA 1465

© 2008 г. И. В. Егоренкова1, К. В. Трегубова, Л. Ю. Матора, Г. Л. Бурыгин, В. В. Игнатов

Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов

Поступила в редакцию 01.08.2007 г.

Установлено, что синтезируемые в процессе периодического культивирования бактерий Paenibacillus polymyxa 1465 экзополисахариды (ЭПС) содержат нейтральные и кислые фракции и являются гетерогенными полисахаридами, представленными комплексом макромолекул с молекулярной массой от 7 х 104 до 2 х 106 Да. Обнаружено преобладание в препаратах ЭПС кислого компонента при культивировании бактерий на глюкозе, что коррелировало с более высокой вязкостью водных растворов ЭПС. В составе эк-зогликанов выявлено присутствие глюкозы, маннозы, галактозы и уроновых кислот. На изолированный препарат ЭПС P. polymyxa 1465 получены поликлональные кроличьи антитела, с помощью которых проведен сравнительный иммунодиффузионный анализ ЭПС ряда штаммов P. polymyxa.

Ключевые слова: Paenibacillus polymyxa, экзополисахариды, вязкость, моносахаридный состав, им-мунодиффузионный анализ.

Почвенные азотфиксирующие ризобактерии Paenibacillus polymyxa стимулируют рост и развитие широкого круга растений благодаря формированию эффективных ассоциативных отношений. Это связано со способностью данных микроорганизмов к азотфиксации, фосфатмобилизации, продукции фитогормонов, антибиотиков, широкого спектра литических ферментов и высокой адаптивностью к условиям существования [1, 2]. Сообщается о способности P. polymyxa к проникновению в корневые ткани [3] и колонизации корней растений с формированием биопленок [4]. Определенное значение при завоевании экологических ниш этими бактериями имеет их высокая конкурентоспособность, обусловленная интенсивным ростом, приспособляемостью, а также способностью к спорообразованию, что позволяет им выживать в стрессовых условиях [2, 5].

Бактерии P. polymyxa обладают способностью к синтезу в значительных количествах нейтральных и кислых экзополисахаридов (ЭПС) [6-9]. Поверхностная локализация внеклеточных полисахаридов придает им свойства посредников во взаимодействии P. polymyxa с другими микро- и макроорганизмами. Кроме того, образуя на поверхности бактерий плотный слой, ЭПС могут экранировать расположенные под ними другие клеточные структуры и определять иммунологические свойства бактерий [10]. Исследованиями ряда ученых [11] показано, что ЭПС P. polymyxa представляют собой биоло-

1 Адресат для корреспонденции (e-mail: room406@ibppm.sgu.ru).

гически активные вещества, которые обладают гемагглютинпрующимп и антивирусными свойствами и повышают неспецифическую реактивность организма. Все сказанное свидетельствует о несомненной актуальности исследований данных биополимеров.

Ранее было показано, что бактерии P. polymyxa 1465 проявляют высокие адгезивные свойства [12]. Немногочисленные литературные данные свидетельствуют о том, что существенную роль во взаимодействии почвенных ризобактерий P. polymyxa с растениями [4, 9, 13] и в адгезии клеток на различных субстратах [14] играет их способность к синтезу экзогликанов.

Цель данной работы состояла в исследовании физико-химических и иммунохимических свойств изолированных ЭПС бактерий P. polymyxa 1465.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе были использованы штаммы бактерий Paenibacillus polymyxa, (ранее Bacillus polymyxa [15]): 1465 (ATCC 8523), 1460 (ATCC 1041), 1459 (ATCC 842), полученные из Чешской коллекции микроорганизмов (г. Брно), 88A (ЦМПМ В-4556), полученный из коллекции микроорганизмов ИБФРМ РАН, и 92 (VNIISHM 92), выделенный Ю.М. Возняковской (ВНИИСХМ, г. С.-Пб., г. Пушкин) из корней пшеницы. Динамику роста, выход экзогликанов и кинематическую вязкость 0.1% растворов ЭПС определяли при выращивании микро-

организмов в строго идентичных условиях в течение 7 сут на круговой качалке (220 об/мин) при 30°С в колбах вместимостью 500 мл, содержащих 150 мл жидкой питательной среды следующего состава (г/л): дрожжевой экстракт - 4; Na2HPO4 - 1.1; KH2PO4 - 0.5; MgSO4 ■ 7H2O - 0.2; (NH4)2SO4 - 0.1; CaCO3 - 0.2; глюкоза - 30, вода дистиллированная до 1 л, pH 7.2-7.5. Кроме глюкозы в качестве источника углерода использовали сахарозу. Растворы сахаров стерилизовали отдельно и вносили в среду перед посевом. Пробы отбирали сразу после посева, затем через 6 ч и далее - каждые сутки в течение недели. Количество жизнеспособных клеток определяли методом высева из серийных десятикратных разведений на чашки с агаризованной капустной средой и выражали в виде десятичного логарифма числа клеток/мл (lg N) [16].

Для выделения суммарных препаратов ЭПС использовали методику, приведенную в работе [17]. После процедуры очистки образцы переводили в лиофильно высушенную форму с использованием устрой в течение а BENCHTOP 2 K ES VirTis (США).

Для измерения собственной вязкости водных растворов полисахаридов препараты ЭПС суспендировали в дистиллированной воде и готовили 0.1% растворы. Кинематическую вязкость растворов ЭПС определяли на капиллярном вискозиметре Оствальда типа ВПЖ-2 с внутренним диаметром капилляра 0.73 мм или 0.99 мм, термостатируемом в водяной бане при 20°С с точностью ±1°С.

Содержание ЭПС в КЖ определяли весовым методом, суммарное содержание углеводов в полученных образцах - спектрофотометрически по реакции с фенолом и серной кислотой [18], количество белка - по модифицированной методике Бредфорд [19] и выражали в процентах к весу условно сухого вещества.

Результаты экспериментов обрабатывали статистически [20].

Гель-фильтрацию полученных ЭПС проводили на колонке (46 х 2.5 см, V0 = 30 мл) с носителем Sepharose CL-4B ("Pharmacia", Швеция), в качестве элюирующего раствора использовали 0.025 М NH4HCO3 (pH 8.3). Гель-хроматографию применяли также для определения молекулярных масс ЭПС. Для этого колонки калибровали по декстранам с известными молекулярными массами (Мм). В качестве стандартов применяли декстраны с Мм: 2 х 104, 7 х 104; 1 х 105, 2.29 х 105, 5 х 105, 2 х 106. Детектирование материалов осуществляли с помощью дифференциального проточного рефрактометра LKB 2142 ("LKB", Швеция). Дополнительно строили элюци-онные профили, определяя во фракциях содержание углеводов по оптической плотности продуктов реакции элюата с фенолом и серной кислотой [18].

Ионообменную хроматографию выполняли на колонке с анионообменником DEAE-Toyopearl 650M (35 х 1.5 см, V0 = 40 мл). Нейтральные и слабокислые компоненты элюировали буфером mpuc-HCl (0.01 M, pH 7.2), кислые компоненты -раствором NaCl в том же буфере при непрерывном градиенте концентрации 0.01-1.0 M. Полученные фракции концентрировали в вакууме (40°С), используя роторный испаритель, и анализировали.

Электрофорез препаратов ЭПС выполняли в 12.5% полиакриламидном геле (ПААГ) с додецил-сульфатом натрия. Визуализацию ЭПС осуществляли окрашиванием гелей красителем на основе азотнокислого серебра [21].

Гидролиз препаратов ЭПС проводили следующим образом: растворяли лиофильно высушенные образцы в 4 N трифторуксусной кислоте (ТФУ) и нагревали в запаянных ампулах в течение 3 ч при 100-105°С. Для удаления остатков ТФУ гидролиза-ты упаривали досуха, периодически добавляя воду. Полученные гидролизаты использовали для хроматографии на бумаге или на пластинках с целлюлозным покрытием и приготовления ацетатов полио-лов для газо-жидкостной хроматографии (ГЖХ).

Нейтральные сахара, уроновые кислоты и ами-носахара идентифицировали методом восходящей бумажной хроматографии или с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинках с целлюлозным покрытием. В качестве элюента использовали смесь пиридина, этилацетата, уксусной кислоты и воды, взятых в объемных соотношениях 5 : 5 : 1 : 3. Проявление нейтральных сахаров и уро-новых кислот проводили путем обработки хромато-грамм раствором анизидинфталата в бутаноле с последующим подогревом до 115°С в течение 5 мин. Для обнаружения аминосахаров хроматограммы обрабатывали раствором нингидрина в ацетоне в соответствии с [22]. Содержание уроновых кислот исследовали также колориметрически по методу Дише [23].

Количественное определение моносахаридного состава проводили методом ГЖХ ацетатов полио-лов после полного гидролиза ЭПС, восстановления NaBH4 и ацетилирования в соответствии с методикой [24]. Образцы анализировали на хроматографе Hewlett-Packard 5890, снабженном капиллярной колонкой со стационарной фазой Ultra 2, в градиенте температуры от 180°С (1 мин) до 290°С со скоростью нагрева 10°С/мин.

Поликлональные антитела получали на суммарный препарат ЭПС бактерий P. polymyxa 1465, выращенных в присутствии глюкозы. Иммунизацию кроликов повторяли 3 раза с интервалом в 2 недели, последовательно вводя в подколенные лимфатические узлы 0.5, 1.0 и 1.5 мг ЭПС. При первой инъекции антиген смешивали с полным адъювантом Фрейнда в соотношении 1 : 1, при последующих - с

N

14 -

12 -

10 -

.4

(н 8 -

О

С 6 -

СО

4 -

2 -

0

£ £

л

В

о м

сп «

РР

0 24 48 72 96 168 Часы

Рис. 1. Динамика накопления ЭПС (1, 2), вязкость 0.1% растворов ЭПС (3,4) и динамика роста (5) бактерий Р. ро1утуха 1465 в течение 7 сут культивирования на средах с глюкозой и сахарозой. N - количество клеток/мл. Культивирование на средах с глюкозой (1, 3, 5) и с сахарозой (2, 4).

5

4

3

2

1

0

неполным адъювантом Фрейнда. Кровь отбирали через неделю после последней иммунизации. Фракции иммуноглобулинов О получали из антисывороток осаждением сульфатом аммония [25]. Двойную иммунодиффузию проводили согласно Оухтерлони и Нильсону [26] в 1% агарозном геле, приготовленном на трмс-глицин-барбитуровом буфере (рН 8.8), нанесенном на обезжиренные стеклянные пластины.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

На жидкой питательной среде с глюкозой бактерии Р. ро1утуха 1465 накапливали в среднем до 2.1 г/л ЭПС (ЭПСГЛ) (рис. 1). При замене в среде выращивания источника углерода на сахарозу выход биополимера существенно возрастал, и максимальный выход состави

Источник: Для просмотра ссылок Вы должны быть авторизованы на форуме.
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимайте на значок пальца в верхнем правом углу и спи крепко.


Вернуться в «Пища как регулятор состояния организма»

Кто сейчас на форуме

Количество пользователей, которые сейчас просматривают этот форум: нет зарегистрированных пользователей и 0 гостей