Темнопольная микроскопия. Принципы темнопольной микроскопии. Фазово-контрастная микроскопия. Техника фазово-контрастной микроскопии. Темнопольная микроскопия позволяет наблюдать живые бактерии. Для темнопольной микроскопии используют темнопольный конденсор, выделяющий контрастирующие структуры неокрашенного материала. Перед началом работы свет устанавливают и центрируют по светлому полю, затем светлопольный конденсор удаляют и заменяют соответствующей системой (например, ОИ-10 или ОИ-21). Препарат готовят по методу «раздавленной капли», делая его как можно более тонким (толщина покровного стекла не должна быть толще 1 мм). Наблюдаемый объект выглядит как освещенный на тёмном поле. При этом лучи от осветителя падают на объект сбоку, а в линзы микроскопа поступают только рассеянные лучи (рис. 11-2). В качестве иммерсионной жидкости пригодно вазелиновое масло.
![208[1].jpg](./download/file.php?id=1802&sid=06eae76f369f61fe45341161d6ba6a09)
- 208[1].jpg (35.63 KiB) 4798 просмотра
Рис. 11-2. Схема светового микроскопа с темнопольным конденсором.
Фазово-контрастная микроскопия. Техника фазово-контрастной микроскопии Фазово-контрастная микроскопия. Техника фазово-контрастной микроскопии
![209[1].jpg](./download/file.php?id=1803&sid=06eae76f369f61fe45341161d6ba6a09)
- 209[1].jpg (29.36 KiB) 4798 просмотра
Фазово-контрастная микроскопия. Техника фазово-контрастной микроскопии Рис. 11-3. Схема фазово-контрастного микроскопа. Фазово-контрастная микроскопия позволяет изучать живые и неокрашенные объекты за счёт повышения их контрастности. При прохождении света через окрашеные объекты происходит изменение амплитуды световой волны, а при прохождении через неокрашенные — фазы световой волны, что используют для получения высококонтрастного изображения в фазово-контрастной (рис. 11-3) и интерференционной микроскопии. Для повышения контрастности фазовые кольца покрывают металлом, поглощающим прямой свет, не влияя на сдвиг фазы. В оптической системе микроскопа применяют специальный конденсор с револьвером диафрагм и центрирующим устройством; объективы заменяют на иммерсионные объективы-апохроматы.
Источник:
Для просмотра ссылок Вы должны быть авторизованы на форуме. MedUniver
Отправлено спустя 3 минуты 36 секунды:Темнопольная микроскопия Микроскопия в темном поле зрения основана на следующем принципе (рис. 1.14). Лучи освещают объект не снизу, а сбоку и не попадают в глаза наблюдателя: поле зрения остается темным, а объект на его фоне оказывается светящимся. Это достигается с помощью специального конденсора (параболоид) или обычного конденсора, прикрытого в центре кружком черной бумаги.
![img12[1].jpg](./download/file.php?id=1804&sid=06eae76f369f61fe45341161d6ba6a09)
- img12[1].jpg (21.51 KiB) 4798 просмотра
Схема микроскопа для наблюдения в темном поле. Рис. 1.14. Схема микроскопа для наблюдения в темном поле. Препараты для темнопольной микроскопии готовят по типу «висячей» и «раздавленной» капли. При приготовлении препарата «раздавленная» капля исследуемый материал (бактериальную культуру в физиологическом растворе) наносят на предметное стекло, которое покрывают покровным стеклом. Капля материала заполняет все пространство между покровным и предметным стеклом, образуя ровный слой. Для приготовления «висячей» капли необходимо использовать специальные предметные стекла с углублением в центре и покровные стекла. На середину покровного стекла наносят исследуемый материал. Края углубления на предметном стекле смазывают вазелином, и им накрывают покровное стекло так, чтобы капля находилась против центра углубления. Затем переворачивают препарат покровным стеклом вверх. Темнопольная микроскопия используется для изучения живых неокрашенных микроорганизмов.
Необходимо выполнить два взаимно противоречащих условия:
1. получить максимальную детальность, необходим объектив с максимальным увеличением, т.е. обычном микроскопе 100х (или 90х). но апертура у него будет скорее всего 1.25-1.3
2. для получения темного поля, на темнопольном конденсоре, максимальная апертура объектива не должна превышать определённого значения, например у ОИ-13 - это примерно 1.0 (АПО 60/1.0-0.7 кое как работает). для чего в обычный ахромат 90/1.25 необходимо инсталлировать специальную диафрагму, которая входит в комплект конденсора. разрешение при этом немного уменьшится, но сохранится масштаб изображения.
Суть не в конструкции диафрагмы (ирисовая, вкладная или ещё какая...), а в ограничении апертуры.
можно использовать сухой объектив с большим увеличением и апертурой 0.85-0.95 вообще без диафрагмы.
или масляный, как у меня АПО 1.0-0.7 с диафрагмой, но в её использовании нет необходимости
Вопрос:
Этим создаётся лучшая чёткость? Лучшее качество изображения?
Нет, это даёт возможность вообще получить тёмное поле как таковое.
т.к. максимальная апертура темнопольных конденсоров, как правило, такая же как и у иммерсионных соток.
апертура же тёмного конуса меньше - 1.0 или ещё меньше. потому и нужна диафрагма, что бы уменьшить апертуру объектива.
[i]Пробовал темнопольный конденсор 1,2-1,4 с объективом 40х/0,75. Качество очень плохое было.[/i
предметное стекло не толще 1.2мм?
конденсор практически вплотную к нему?
масло в наличии?
осветитель покрывает максимальную апертуру конденсора?
Для объектива 20х/0,4 у меня кружок 11 мм, а для 40х/0,65 - 17 мм. Кружки напечатаны на пленке для оверхэда (годоскопа) на лазерном принтере из-под Corel Draw, поверх тонера дополнительно закрашены черным фломастером (плотности тонера недостаточно). Верхнюю линзу конденсора с 20х и 40х я не снимаю, 8х и ПЛАН 9х с темным полем использую с диафрагмой для 20х.
стандарты для темнопольных конденсоров на цайсс.
Ултраконденсор Апертура 1,2 - 1,4.
Подходит для Апертур 0,75 - 1,0 Объективов
(Иммерсионный объктив - с Апертурой свыше 1.0 - должен всегда иметь Ирис, чтобы его Апертура на мах. 1,0 уменьшина была)
---- Сухой Темнопольный конденсор 0,8 - 0,95
Подходит для 0,6 - 0,75 Объективов
(Это идеальный темнопольный конденсор для 40 го объектива с апертурой 0,65 - 0,75)
---- Сухой Темнопольный конденсор 0,7 - 0,85
Подходит для Апертур 0,4 - 0,6
баночка вроде с маслом есть в комплекте..
