На страницах этого форума публикуются материалы предназначенные для ищущих новые пути в устранение проблем не решаемых современным обществом.
Форум не имеет целью популяризации чьих либо идей. Форум предназначен для понимания этих идей и ответа на важнейшие вопросы человеческого бытия.
Закон Вселенной - "прежде чем получить сначала отдай!" - ссылки видят зарегистрированные участники форума имеющее более 10 сообщений.
Не используйте бессмысленные имена пользователя, состоящие из набора цифр и букв, как у робота. Пользователи с такими именами не будут регистрироваться, а те кто уже зарегистрирован, должны послать в администрацию их новое имя. Такое решение принято для борьбы с роботами и спамерами.
Уважаемые господа!
Время от времени происходит систематизация по темам Ваших постов. Если Ваш пост "исчез", ищите его поиском Ваших постов в профиле.

Производство пробиотика Бифидумбактерин

Аватар пользователя
Ansaraides
NaviGator
NaviGator
Сообщений: 4590
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Правь
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1307 раза
Поблагодарили: 2537 раза

Производство пробиотика Бифидумбактерин

Сообщение Ansaraides » 12 окт 2017, 07:43

Получение маточной культуры
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимай на значок "пальца" в верхнем правом углу и спи крепко.

Аватар пользователя
Ansaraides
NaviGator
NaviGator
Сообщений: 4590
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Правь
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1307 раза
Поблагодарили: 2537 раза

Re: Производство пробиотика Бифидумбактерин

Сообщение Ansaraides » 12 окт 2017, 07:45

Получение нативной микробной взвеси

Получение культуры и генерации

Технологический процесс проводить в помещении VI "Помещение получения производственных культур" класса чистоты В и в помещении VII "Термостатная комната" класса чистоты В.

Биологическим агентом для получения бифидумбактерина является штамм Bifidobacterium bifidum № 1.

Для получения культуры и генерации 20 флаконов с лиофилизированным штаммом Bifidobacterium bifidum № 1, рабочей посевной серии, с КОЕ / доза = 10 обрабатывают 76% спиртом, вскрывают и градуированной пипеткой в асептических условиях вносят 5 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия. Содержание флаконов перемешивают и той же пипеткой переносят в стерильный баллон, в котором находится 0,8 л стерильного бифидум среды.

Содержание баллонов тщательно перемешивают, закрывают ватно-марлевой пробкой и помещают в термостатные комнату, где автоматически поддерживается оптимальная для роста бифидобактерий температура (38±1)°С. Посев выдерживают при указанной температуре в течение 70-72 часов.

Для контроля чистоты производственного штамма остатки посевного материала пастеровской пипетки засевают в пробирки с питательным агаром и МПА с 5% глюкозы и выдерживают в термостате при температуре (37±1)°С в течение 24 часов.

Чистую микробную культуру и генерации в баллонах в объеме 1,6 л передают на операцию Получение культуры II поколения.

Получение культуры II поколения

Культуру и генерации из баллона пересевают в стерильные баллоны, в которых содержится по 17,7 л стерильного бифидум среды, тщательно перемешивают, закрывают ватно-марлевой пробкой и инкубируют в термостатный комнате при температуре (38±1)°С в течение 46-48 часов при тщательном перемешивании городу емкости 3 раза в день.

Остатки культуры и генерации из емкости контролируют отсутствие посторонней микрофлоры методом посева по 0,005 мл или 0,01 мл на одну чашку Петри с МПА и на одну чашку Петри со средой Сабуро. Посевы на МПА инкубируют в термостате при температуре (38±1)ºС на протяжении 48 часов. Посевы на среде Сабуро инкубируют при температуре (22±1)°С в течение 72 часов. После окончания инкубации на чашках Петри должен отсутствовать рост посторонних микроорганизмов.

Чистую культуру II генерации в баллонах в объеме 15,51 л передают на операцию Получение нативной микробной массы (III поколение).

Получение нативной микробной взвеси (III генерация)

Выращивание бифидобактерий проводят в биореакторе емкостью 250 л. Перед началом работы его стерилизуют паром. Режим стерилизации: температура 138±1°С - 20 минут или температура 121-125°С - 45 минут.

В простерилизованные, охлажденный биореактор через специальный сифон вакуумом загружают стерильное бифидум среду. Объем загруженного питательной среды - 90 л.

Питательная среда повторно стерилизуют в биореакторе при температуре 110°С в течение 30 минут, путем подачи пара в рубашку аппарата. После охлаждения простерилизованного среды до температуры культивирования (38±1)°С в асептических условиях отбирают стерильную пробу для контроля стерильности питательной среды.

Засев питательной среды осуществляется при температуре (38±1)°С.

Процесс культивирования бифидобактерий в биореакторе длится 6-8 часов под аргоновой подушкой. Пробы культуральной жидкости из аппарата отбирают через каждые 2 часа для определения оптической плотности, специфической активности, проверки значений рН и для контроля чистоты культуральной жидкости. После засева питательной среды в процессе выращивания необходимо:

Следить за температурой культивирования (38±1)°С;
Давление в аппарате поддерживать в пределах 0,03 -0,04 МПа;
Мешалку в аппарате включать на несколько минут (2-3 минуты) только перед отбором проб и после подачи 5% раствора аммиака, частота перемешивания 70-100 о6/хв;
РН в аппарате поддерживать в пределах 6,3-6,5, корректируя 5% раствором аммиака.

Замер рН и температуры в аппарате производится автоматически. По окончании процесса культивирования показатель рН устанавливают в пределах 6,3-6,5, после чего микробную суспензию охлаждают подачей холодной водопроводной воды в рубашку аппарата.

Остатки культуры II генерации из емкости контролируют отсутствие посторонней микрофлоры методом посева по 0, 05 мл или 0,01 мл на одну чашку Петри с МПА и на одну чашку Петри со средой Сабуро. Посевы на МПА инкубируют в термостате при температуре 38±1°С в течение 48 часов. Посевы на среде Сабуро инкубируют при температуре (22±1)°С в течение 72 часов. После окончания инкубации на чашках Петри должен отсутствовать рост посторонних микроорганизмов.

Контролируют специфическую активность остатков культуры II генерации из емкости путем посева в 9 пробирок, содержащих по 9 мл бифидум среды. 1 мл остатков культуры II генерации вносят в первую пробирку с 9 мл бифидум среды-это первое разведение 10-1. Полученное разведение тщательно перемешивают путем 12-15-кратного покачивания пробирки. С этой пробирки делают последовательные десятикратные разведения до 10-9. Посевы термостате при температуре (38±1)°С в течение 96 часов. После окончания инкубации в разведении 10-6 должен наблюдаться рост колоний бифидобактерий в виде «гвоздей», «крох» и «нитей».

По окончании процесса культивирования микробную взвесь с биореактора сливают в стерильные баллоны емкостью 16 л.

Для получения одной серии готовой продукции формируется по загрузке в лиофильной сушки ТГ-50, 12,5 л микробной суспензии передают на стадию Получение производственной культуры. Микробную взвесь, которая осталась, хранят в холодильной камере при температуре (3-4)°С до следующей операции сушки.

Ферментер после слива микробной взвеси заполняют очищенной водой, которую нагревают до 100°С и выдерживают в течение 30 минут, после чего с помощью сжатого воздуха сливают в канализацию промышленных стоков. Пропарка пустой ферментера проводят в течение 15 минут.

Для просмотра ссылок Вы должны быть авторизованы на форуме.
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимай на значок "пальца" в верхнем правом углу и спи крепко.

Аватар пользователя
Ansaraides
NaviGator
NaviGator
Сообщений: 4590
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Правь
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1307 раза
Поблагодарили: 2537 раза

Re: Производство пробиотика Бифидумбактерин

Сообщение Ansaraides » 12 окт 2017, 07:49

Производство пробиотика Бифидумбактерин (2). Получение производственной культуры
Технологический процесс ведут в помещении VI «Помещение получения производственных культур» класса чистоты В и в помещении VII "Термостатная комната" класса чистоты В.
probiotik[1].jpg
probiotik[1].jpg (11.8 KiB) 102 просмотра

Производственная серия бифидумбактерина формируется на стадии Получение производственной культуры, на которой серии присваивается порядковый номер. Производственная серия составляет в общем объеме 81,6 л производственной культуры.

Нативную микробную взвесь в количестве 12,5 л из баллона в асептических условиях разливают по 2 л в стерильные баллоны. В каждый баллон с нативной микробной взвесью добавляют через сифон вносят по 2,7 л стерильного сахарозо-желатиновые среды (СЖС). Тщательно перемешивают. Доводят 5% раствором аммиака рН до 6,0 - 6,5. В баллон через сифон вносят 9,0 л стерильного молока. Тщательно перемешивают. Измеряют рН полученной производственной культуры и, при необходимости, доводят 5% раствором аммиака: рН до 6,0 - 6,5. Объемное соотношение компонентов производственной культуры должно быть следующим: 14,6% биомассы: 19,7% СЖС: 65,7% молока.

Остатки культуры III поколения из емкости контролируют на отсутствие посторонней микрофлоры методом посева по 0, 05 мл или 0,01 мл на одну чашку Петри с МПА и на одну чашку Петри со средой Сабуро.

Посевы на МПА инкубируют в термостате при температуре 38°С в течение 48 часов. Посевы на среде Сабуро инкубируют при температуре 22ºС в течение 72 часов. После окончания инкубации на чашках Петри должен отсутствовать рост посторонних микроорганизмов.

Контролируют специфическую активность остатков культуры III генерации из емкости путем посева в 9 пробирок, содержащих по 9 мл бифидум среды. 1 мл остатков культуры III поколения вносят в первую пробирку с 9 мл бифидум среды - это первое разведение 10-1. Полученное разведение тщательно перемешивают путем 12-15-кратного покачивания пробирки. С этой пробирки делают последовательные десятикратные разведения до 10-9. Посевы термостате при температуре (38±1)°С в течение 96 часов. После окончания инкубации в разведении 10-8 должен наблюдаться рост колоний бифидобактерий в виде «гвоздей», «крох» и «нитей».

Чистую производственную культуру в баллонах в объеме 81,6 передают на стадию «Стерильный розлив производственной культуры».

Стерильный розлив производственной культуры

Технологический процесс ведется в помещении ХХIII "Помещение, разлива "класс чистоты В (зона А). Биксы со стерильными флаконами, стерильные салфетки, обработанные металлические кассеты, стерильные дозирующие устройства для разлива, которые подготовлены к работе на операции Подготовка первичной упаковки »подают на розлив. Баллон, соблюдая правила асептики, соединяют с дозирующим устройством с помощью стерильных сифонных трубок.

Производственную культуру бифидобактерий разливают вручную по 5 или 10 доз в стеклянные флаконы типа ФО-1-10 или ФИ-05 из стекла марки НС-1А или НС-1 по ТУ 9461-025-00480678-99, или во флаконы типа ФЛП-10 -А, или ФЛП-5-А из стекла марки УСП-1 по ТУ У 00480945-006-98 или во флаконы типа ФО-1-10 или ФИ-1-5 из стекла марки НС-3 по ТУ 9461-010 -00480514-99, или во флаконы инъекционные прозрачные или коричневого цвета с печного стекла производства фирмы "SCHOTT forma vitrum" forma vitrum kft. (Свидетельство о государственной регистрации № 7521/2008).

Контроль наполнения флаконов осуществляют аппаратчик и микробиолог участки в начале, середине и конце разлива. В случае несоответствия дозы - проверяют калибровку дозирующего устройства. Наполненные производственной культурой флаконы устанавливают в и кассеты, которые закрывают стерильными безворсовыми салфетками. Салфетки фиксируют резинками, кассеты закрывают крышками и передают на стадию «лиофилизация полупродукта».


Автор статьи: Просяник Алина, студентка кафедры биотехнологии и микробиологии Национального университета пищевых технологий
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимай на значок "пальца" в верхнем правом углу и спи крепко.

Аватар пользователя
Ansaraides
NaviGator
NaviGator
Сообщений: 4590
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Правь
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1307 раза
Поблагодарили: 2537 раза

Re: Производство пробиотика Бифидумбактерин

Сообщение Ansaraides » 12 окт 2017, 08:14

Производство пробиотика Бифидумбактерин (3). Приготовление препарата

Лиофилизация промежуточного продукта – пробиотика Бифидумбактерин

Технологический процесс производят СОП 12-05-09 «Проведение лиофилизации препаратов»

Замораживание промежуточного продукта пробиотика Бифидумбактерин

Технологический процесс ведут в помещении XV «Помещение лиофильной сушки" класса чистоты С. Лиофилизация промежуточного продукта осуществляют в лиофильные сушильной установке марки ТГ - 50, а предварительное заморозков проводят в установке глубокой заморозки. В комплект ТГ - 50 входят:

Вакуумная установка, в том числе: сушильная камера, конденсатор, пластинчато-роторный вакуум-насос, термостат;
Холодильная установка;
Распределительный шкаф.

Сушильная камера и конденсатор разделены между собой защелкой. В сушильной камере установлено 7 полок для размещения продукта, подлежащего высушиванию.

Охлаждение или нагрев полок осуществляется за счет подачи в полость полок, соответственно, хладоносителя фреона или водно-глицериновой смеси (глизантина).

В процессе лиофильной сушки удаленная из продукта влага конденсируется на поверхности конденсатора охлаждается фреоном.

Обслуживание установки и контроль за процессом сушки осуществляется с пульта управления. При этом на местный щит КИПиА вынесены следующие показатели:

Величина вакуума в системе,
Температура любых двух полок сушильной камеры;
Температура продукта на данных полках;
Температура глизантина.

Поступившие кассеты с производственной культурой загружают в установки глубокой заморозки, предварительно сняв с них крышки. Установку охлаждают до температуры минус 45ºС путем подачи фреона в змеевиковый испаритель. После достижения заданной температуры кассеты с препаратом держат в установке 3 часа. Общее время замораживания препарата 24 часа.

Лиофильное высушивание пробиотика Бифидумбактерин

По окончании замораживания кассеты с замороженным препаратом немедленно перегружают в сушильную камеру установки ТГ-50 по 36 кассет в одну установку. Полки установлены предварительно охлаждают до температуры минус 34-36ºС. Дверь камеры герметично закрывают, включают вакуум-насос и подают фреон в конденсатор. При достижении температуры в конденсаторе минус 45°С, соединяющих конденсатор с сушильной камерой (открывают задвижку) и начинают процесс основной сушки. Сушку осуществляют при следующих параметрах:

Величина вакуума: 50-70 Па;
Температура полок: минус 34-36°С;
Температура продукта на полках: минус 34-36°С.

Охлаждение фреона осуществляется оборотной водой. Через три часа от момента загрузки кассет с препаратом в сушильную камеру прекращают подачу фреона в полки и начинают подачу в полки глизантина, температура которого соответствует температуре окружающей среды. В течение 20-25 часов глизантин циркулирует через полки сушильной камеры, после чего включают ТЭНы, чтобы увеличить температуру глизантина. Ее постепенно повышают на 1-4ºС в час до достижения 28-30ºС.

После достижения температуры продукта на полках сушильной камеры 28-30ºС процесс сушки продолжают в течение 6 часов. Общее время проведения процесса сушки (от начала замораживания продукта в установке глубинного заморозки составляет 96 часов.

По окончании сушки закрывают задвижку (отсоединяют сушильную камеру от конденсатора), отключают вакуум-насос, отключают подачу фреона в конденсатор, отключают насос циркуляции глизантина. Далее подают в камеру стерильный воздух.

Для достижения в камере атмосферного давления, кассеты лиофилизированной культурой выгружают, кассеты закрывают крышками и передают на стадию «Герметизация промежуточного продукта»

Герметизация промежуточного продукта пробиотика Бифидумбактерин

Технологический процесс проводится в помещении ХХИV "Помещение закупорки флаконов» (класс чистоты В) и в помещении ХХV «завальцовки флаконов» (класс чистоты С).

Флаконы с лиофилизированным промежуточным продуктом, поступившим в кассетах, за соблюдением правил асептики закрывают на столе стерильными резиновыми пробками.

В процессе закупорки контролируют описание промежуточного продукта соответствовать требованиям АНД, а также целостность флаконов (трещины, сколы). В случае несоответствия описания полупродукта или нарушения целостности флаконов их отбраковывают.

Закупоренные пробками флаконы в кассетах через окно передач, передают в помещение завальцовки флаконов. Флаконы, закупоренные пробками, накрывают стерильными алюминиевыми колпачками и передают для обжатия до полуавтомата.

В течение процесса проверяют качество обжатия. Отбраковывают флаконы, с некачественно прилегающими колпачками, с гофрами вокруг горловины, с колпачками оборачиваются и необтисненные флаконы. Отбраковывают также флаконы, получившие повреждения стекла в процессе обжатия. Разбитые флаконы отправляют в отходы на утилизацию.

Загерметизированные флаконы после просмотра составляют в специальную тару и передают на стадию «Упаковка, маркировка, отгрузки готовой продукции».

Упаковка, маркировка, отгрузки готовой продукции пробиотика Бифидумбактерин

Маркировка флаконов пробиотика Бифидумбактерин


Технологический процесс ведут в помещении XIV «Помещение упаковки и маркировки» класс чистоты - не классифицируется.

Маркировка флаконов проводят на полуавтомате методом глубокой печати согласно «Технологической инструкции № 11 по маркировке флаконов с препаратом».

Перед началом работы осматривают и смазывают рабочие механизмы, включают полуавтомат и проверяют отсутствие недостатков в работе. Нанесение надписи на флакон осуществляется краской глубокой печати, которая попадает на флакон с помощью системы валиков и бронзового клише, установленном на одном из них. Краску наносят на первый валик, прокручивают барабан и проверяют качество печати на отдельных флаконах. При сгущении краски ее разводят 96% этиловым спиртом.

Флаконы складывают в специальные лотки 200-210 штук. Для нанесения надписи лоток с флаконами устанавливают над барабаном и осторожно открывают съемку задвижку так, чтобы флаконы постепенно попадали на барабан. Барабан, вращаясь, захватывает флаконы и подводит к последнему валике, они с помощью придавливателя контактируют с ним, принимая на себя оттиск. На флакон краской глубокой печати для стеклянных изделий по ТУ У 42.34.011-97 нанесено: название препарата украинским и / или русском языках, количество доз, номер серии, срок годности.

В случае боя флаконов в бункере или гнезде барабана, полуавтомат останавливают, вынимают стекло хирургическим пинцетом и протирают салфеткой до полного удаления остатков препарата.

В случае некачественного нанесения текста полуавтомат останавливают, проводят регулировку и наладку. Отбракованные флаконы протирают и направляют на повторное нанесение текста. Флаконы, вышедшие из печати должны иметь полный и четкий надпись.

Лаборант отделения отбирает пробы препарата для проведения контроля на производстве. Контроль готового препарата I проводится согласно "Технологической инструкции № 3 по контролю Бифидумбактерин-Биофарма".

Качественно промаркированы флаконы составляют в лотки, куда вкладывают заполнены идентификационные этикетки. После контроля на производстве серию препарата передают на операцию «Упаковка готовой продукции».

Упаковка готовой продукции пробиотика Бифидумбактерин

Технологический процесс проводится согласно «Технологической инструкции № 12 по упаковке флаконов с препаратом». По 10 флаконов препарата с инструкцией по применению вкладывают в пачку по ОСТ 64-071-89 из картона коробчатого (хром-эрзац) по ГОСТ 7933-89 с перегородками или гофрированной вкладкой, или полимерным вкладышем из пленки поливинилхлоридной по ТУ У 64 - 23518596-001-99 на столе.

На пачке (макете) и этикетке групповой тары украинском и русском языках нанесено: "Украина", ОАО "Биофарма", товарный знак и адрес, название препарата на латинском, русском и украинском языках, лекарственную форму, количество доз, количество флаконов, "Для применения через рот", условия хранения, "Хранить в недоступном для детей месте ", номер серии, регистрационный номер, срок годности, штрих-код, регистрационный номер в стране-импортере (при необходимости).

Номер серии и срок годности допускается наносить на боковой стороне пачки методом тиснения. Пачки с продуктом по 45 штук укладывают в ящики. Ящики оклеивают по швам скотчем. (На этикетке групповой тары дополнительно указывают количество пачек).

Транспортная маркировка по ГОСТ 14192-96. При поставке препарата на экспорт допускается текст маркировки указанной языке при обсуждении в контракте. Групповая и транспортная тара в соответствии с ГОСТ 177б8.90.

Готовую продукцию изолировать «Помещения карантинного хранения готовой продукции». Серию промаркировать этикеткой. Продукцию хранить в защищенном от света месте при температуре не выше 2-8ºС. Готовую продукцию предъявить сотрудникам ОТК для проведения выходного контроля.

Микробиолог участка передает «Сообщение о предъявлении продукции на приемный экзамен и оформленный "Протокол производства серии". Лаборант ОКК отбирает от серии необходимое количество препарата для контроля в ОКК, для внешнего контроля и для музея юридических образцов, где вместе с протоколом производства серии сохраняют лекарственное средство в течение 2 лет (срок годности плюс один год).

Начальник ОКК подписывает приходную накладную, Заместитель Председателя правления по качеству - Сертификат качества на разрешение и реализацию.

Протокол производства серии готовой продукции передается на хранение в ОКК предприятия, сводный протокол производства серии готовой продукции содержатся в цехе в течение 3 лет (срока годности препарата плюс один год).

Готовую продукцию вместе с сопроводительными документами передают в склад готовой продукции согласно Генеральной СОП 16-01-01 «Правила приема, хранения и отпуска ЛС на складе готовой продукции».

Групповая и транспортная тара в соответствии с ГОСТ 17768-90. Транспортная маркировка по ГОСТ 14192-96. Транспортировка в соответствии с ГОСТ 17768-90. Хранят препарат пробиотик Бифидумбактерин в защищенном от света месте при температуре 2-8 º С.
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимай на значок "пальца" в верхнем правом углу и спи крепко.

Аватар пользователя
Ansaraides
NaviGator
NaviGator
Сообщений: 4590
Зарегистрирован: 09 июл 2013, 08:07
Награды: 8
Откуда: Правь
Пол: Мужской
:
Замок
Благодарил (а): 1307 раза
Поблагодарили: 2537 раза

Re: Производство пробиотика Бифидумбактерин

Сообщение Ansaraides » 12 окт 2017, 08:54

Производство пробиотика Бифиформ – питательная среда для культивирования

Питательная среда

Растущая потребность в пробиотических препаратах и продуктах питания обусловливает необходимость разработки новых эффективных и недорогих производственных питательных сред для накопления биомассы бифидобактерий. Производственные питательные среды должны обеспечивать высокую скорость размножения бактерий вместе с минимальной длительностью их ростового цикла для получения высокой концентрации жизнеспособных микробных клеток в единице объема питательной среды (не менее 108 КОЕ / мл). Сырье для приготовления таких сред должна быть доступной, недорогой, технологически целесообразной.

Бифидобактерии при первичном выделении являются строгими анаэробами. В присутствии углекислого газа они могут быть толерантными к кислороду. При лабораторном культивировании эти микроорганизмы приобретают способность развиваться в присутствии некоторого количества кислорода, а в высокопитательных средах - расти в условиях полностью аэробных. Чувствительность к кислороду у многих штаммов бифидобактерий варьирует, что обусловлено различиями в механизме брожения.

Размножение бифидобактерий обусловлено огромным количеством факторов роста. Многие виды требуют биотин, пантотеновая кислота, цистеин, рибофлавин, пуриновые и пиримидиновые основания, пептиды, аминосахара, кофермент А, олигосахариды, некоторые ненасыщенные жирные кислоты и др.. Отдельные штаммы требуют углекислого газа, аммиака, гистидина. Из аминокислот требуется лизин, пролин, серин, аланин, аспарагинова и глутаминовая кислоты.

В синтетических средах бифидобактериям для роста необходимы железо, магний, фосфаты, хлориды калия и натрия, в некоторых случаях - марганец.

Бифидобактерии культивируют, создавая анаэробные условия или понижая окислительно-восстановительный потенциал среды, на молоке, гидролизованном молоке и гидролизат казеина, а также на печеночном бульоне с добавлением ростовых веществ (дрожжевого автолизат, кукурузного экстракта, цистеина и др.). На плотных питательных средах бифидобактерии образуют разнообразные колонии плоские, полушаровидные, блестящие, жесткие, окруженные валом, имеют более темный центр и т.д. Цвет колоний меняется от белого и серого до темно-коричневого. Колонии часто напоминают формой зерно гречки или усеченную треугольную пирамиду, на некоторых средах колонии имеют форму чечевицы.

В настоящее время для накопления биомассы Bifidobacterium longum используют питательные среды различного состава. Основой служат гидролизаты и экстракты растительного и животного происхождения: среда Блаурока на основе печеночного отвара, кукурузно-лактазная среду на основе кукурузного экстракта, среды на основе полученного мясного экстракта.

Для культивирования бифидобактерий распространенным считается печеночно-цистеиновых среда (среда Блаурока).

Для приготовления среда Блаурока 500 г говяжьей печени, освобожденной от сухожилий, пропускают через мясорубку, заливают двойным количеством воды и кипятят в течение 2 ч, затем фильтруют. Фильтрат доводят дистиллированной водой до 1 000 см и вносят 10 г пептона, 10 г лактозы, 100 мг хлористого цистеина, 5 г NаС1 и агара 1-2 г. рН среды 6,8-7,0. Однако это среда дорогое, содержит дефицитные компоненты, поэтому мало пригодно для использования в промышленных условиях.

В молочной промышленности для культивирования бифидобактерий рекомендовано гидролизатно-молочная среда - ГМ-среду, содержащую гидролизат обрату, NaCl, лактозу, L-цистеин солянокислый, пептон, агар-агар и воду. Гидролизатно-молочное питательную среду готовят следующим образом:

Приготовление гидролизованного молока. Обычное или восстановленное обезжиренное молоко (молочный обрат) доводят до кипения и кипятят 2 мин, охлаждают до 14oC, устанавливают pH 7,9 10-20% раствором NaOH.

Добавляют панкреатин из расчета 1 г/дм3, предварительно разведенный в небольшом количестве нагретой до 44oC воды, размешивают и ставят в термостат на 40oС в ватной пробкой. В течение первых двух часов перемешивания и коррекцию pH до 7,9 проводят каждые 30 мин, в следующие два часа через каждый час. Через 4 ч от начала гидролиза добавляют 1-2% хлороформа, закрывают резиновой пробкой и ставят в термостат. Через 4 часа доводят pH до 4,4 30% раствором уксусной кислоты, кипятят, помешивая, не менее 15 мин, фильтруют через бумажный фильтр. Готовый гидролизат должен содержать 200-300 мг /% аминного азота, прозрачный, реакция его нейтральная или слабокислая.

Приготовление гидролизатно-молочной среды. Разводят гидролизованные молоко питьевой водой в соотношении 1:1. В небольшом количестве разбавленного гидролизата расплавляют агар в количестве 2,5 г на 1 дм3 среды. К остальным количества гидролизата добавляют 28 г пептона и 3,5 г хлористого натрия, смесь нагревают до температуры 80oC, после чего смешивают с расплавленным агаром. В смеси устанавливают pH 7,5, кипятят в течение 15 мин, дают отстояться, сливают с осадка, не фильтруя, доливают горячей дистиллированной водой до заданного объема и добавляют в нее 10,0 г лактозы и 0,15 г солянокислого цистеина. Среда заливают в пробирки высоким столбиком 10 см3 и стерилизуют при температуре 112oC в течение 30 мин с предварительным подогревом автоклава паром в течение 30 мин. pH готового среды 7,1-7,3.

Гидролизатно-молочная среда широко используется в Украине и других странах СНГ для наращивания биомассы бифидобактерий. Эта среда обеспечивает получение бифидобактерий в концентрации 108-109 КОЕ / мл. Оно достаточно простое в изготовлении. Вместе с тем, ГМС имеет ряд недостатков. Основной из них - медленный рост бифидобактерий. Так, при выращивании на этой среде бифидобактерии достигают максимума концентрации после 18-24 ч культивирования.

Для выделения и выращивания Enterococcus faecium существует ряд селективных сред: основа кровяного агара с азидом, азидодекстрозний бульон, KF-стрептококковый агар, М-агар для энтерококков, стрептококковый селективный агар и др. На кровяном агаре колонии энтерококков мелкие, кремовые или белые, гладкие с ровным краем, различающихся по типу гемолиза. Данный штамм - гомоферментативных, газа не образует конечный продукт ферментации глюкозы и других углеводов - молочная кислота. В энтерококков резко выраженные редуцируя свойства: они обесцвечивают лакмус и метиленовый синий в молоке, редуцируют нитраты в нитриты.

Для культивирования Enterococcus faecium используют азидно-глюкозный бульон. Питательная среда предназначена для выделения и культивирования энтерококков, выделенных из исследуемого материала. Среда является селективным и обеспечивает преимущественный рост энтерококков. Азидно-глюкозный бульон готовят следующим образом: Приготовление МПБ. 500 г мелко нарезанного свежего мяса без костей, жира и сухожилий заливают в эмалированной кастрюле 1 л водопроводной воды, нагретой до 50°С, и оставляют настаиваться 12 ч при комнатной температуре или 1 ч при 50-55°С. Мясо отжимают, экстракт процеживают через марлю со слоем ваты, кипятят в течение 30 мин для свертывания коллоидных белков и фильтруют дважды (первый раз через марлю с ватой, второй - через бумажный фильтр). Фильтр доливают водой до 1 л, разливают в колбы, закрывают ватными пробками и стерилизуют при 120°С 20 мин (пробки колб закрывают сверху колпачками из бумаги). Ватные пробки должны быть плотными, поскольку они являются фильтром, препятствующим проникновению бактерий из воздуха после стерилизации. Мясной бульон может быть использован в любое время для приготовления соответствующих сред. Если их готовят сразу, то предварительная стерилизация излишня. Если желательно иметь мясной бульон особо высокой питательности, во время настаивания мяса с водой добавляют немного пепсина и подкисляют бульон соляной кислотой. Пепсин дополнительно гидролизует белковые соединения мяса, и количество усвоенных бактериями питательных веществ возрастает. Мясо можно заменить мясным экстрактом, беря его по 5 г на 1 л среды.

Для приготовления МПБ до 1 л мясного бульона добавляют 5-10 г пептона (пептон - первый продукт гидролиза белка с высокой молекулярной массой) для повышения калорийности среды и 5 г поваренной соли с целью создания осмотической активности. Среда нагревают до растворения пептона, постоянно помешивая. Затем устанавливают нейтральную или слабощелочную реакцию среды, подливая 20% раствор Na2CO3 (до посинения влажной красной лакмусовой бумажки, при этом фенолфталеин еще не показывает щелочную реакцию - при добавлении его к среде в фарфоровой чашке розовая окраска не появляется). Удобно использовать индикатор бромтимолблау. 1-2 капли его вносят стеклянной палочкой в фарфоровую чашку и добавляют каплю бульона. В нейтральной среде бромтимолблау темно-зеленый, в кислой - желтый, в щелочной - синий. После установки реакции среду снова кипятят 5-10 мин и белки свернулись от изменения реакции, фильтруют через бумажный фильтр без осветления бульона или осветлив его белком. Прозрачный МПБ разливают в пробирки, закрывают ватными пробками и стерилизуют при 120°С в течение 20 мин.

Приготовление азидно-глюкозного бульона. До 1 дм3 МПБ добавляют 5,0 г пептона, 7,5 г глюкозы, 2,5 г натрия хлорида, составляющие растворяют нагреванием. После этого охлаждают и устанавливают рН так, чтобы после стерилизации при 25°С он составлял (7,2 ± 0,1). Затем основу среды стерилизуют текучим паром (при 100°С) в течение 30 мин. В основу среды, охлажденного до 50°С, добавляют 2,0 см3 натрия азид, и 2,0 см3 раствора бромкрезолового пурпурного. Готовая среда не стерилизуют. Среда хранят в защищенном от света и высыхания месте при (4 ± 2)° С не более 3 мес. Непосредственно перед использованием ее разливают по 5 см3 в стерильные пробирки.

Так, бифидобактерии и энтерококки, наряду с другими представителями нормальной кишечной микрофлоры, выполняют и регулируют многочисленные функции организма. В процессе жизнедеятельности они образуют органические кислоты, что приводит к установлению нормальной среды для кишечника, препятствуют размножению патогенной, гнилостной и газообразующей микрофлоры кишечника. Способствуют процессам ферментативного переваривания пищи, так как усиливают гидролиз белков, сбраживают углеводы, омилюють жиры, растворяют клетчатку, стимулируют перистальтику кишечника, способствуют нормальной эвакуации кишечного содержимого.

Bifidobacterium longum ATCC 15707 в промышленности культивируют, создавая анаэробные условия или понижая окислительно-восстановительный потенциал среды, на гидролизованном молоке. Для культивирования Enterococcus faecium SF68 используют азидно-глюкозный бульон. Питательная среда предназначена для выделения и культивирования энтерококков, выделенных из исследуемого материала. Среда является селективным и обеспечивает преимущественный рост энтерококков.

Автор стаnьи: Билецкая Д. Материал статьи любезно предоставила Просяник Алина, студентка кафедры биотехнологии и микробиологии Национального университета пищевых технологий.
Скрытый текст. Нужно быть зарегистрированным и иметь сообщений: 20
Все очень просто! По Гиппократу - пища это лекарство. Но не можем же мы постоянно принимать лекарства!
"Есть или не есть и что есть из того, что есть?"
Если ты поднялся на вершину горы и тебе некуда идти - иди дальше!

Нажимай на значок "пальца" в верхнем правом углу и спи крепко.


Вернуться в «Закваски»

Кто сейчас на форуме

Количество пользователей, которые сейчас просматривают этот форум: нет зарегистрированных пользователей и 1 гость