image001ОТЧЕТ
о научно-исследовательской работе
«Изучение колонизирующей способности, выживаемости и размножения сертифицированных пробиотических лактобактерий и бифидобактерий на пищевых волокнах пшеничных отрубей и ферментированных пищевых волокнах препарата Рекицен-РД»

 

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

3

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

3

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. ОБОРУДОВАНИЕ

4

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

5

ОБОБЩЕНИЕ И ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

13

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

15

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

17

ВВЕДЕНИЕ
Пробиотики – довольно распространенные препараты, созданные на основе штаммов бактерий. Для того, чтобы бактерии были включены в группу пробиотических микроорганизмов они должны соответствовать определенным критериям:

1) выживать при пассаже через желудочно-кишечный тракт;

2) адге- зироваться на эпителиальных клетках кишечника с последующей колонизаци- ей;

3) стабилизировать кишечную микрофлору;

4) не иметь признаков патоген- ности; 5) быть экологически безопасными;

6) сохранять жизнеспособность в пищевых продуктах и в процессе получения фармакопейных лиофилизирован- ных препаратов;

7) быстро размножаться, колонизируя желудочно-кишечный тракт;

8) персистировать с проявлением родовых свойств [1].

Перечисленным критериям в наибольшей степени соответствует нормальная микрофлора ки- шечника, включая таких постоянных ее представителей, как лакто- и бифидо- бактерии, кишечная палочка [2, 3]. Несомненно, пробиотики создают эффект, но не всегда и не такой, как предполагалось [4]. Именно поэтому для восстанов- ления количественного и качественного состава кишечной микрофлоры всё шире стали применять пребиотики, обеспечивающие безопасное и эффективное прямое положительное воздействие на нормальную микрофлору желудочно-ки- шечного тракта и каскад вторичных благоприятных для человека эффектов [5]. Многочисленными исследованиями установлено, что пребиотическим эффектом обладает большое число соединений, в том числе полисахариды (пектины, декстрин, инулин и др.), пищевые волокна трав (псиллиум (Мукофальк и др.), злаковых (отруби, Рекицен-РД и др.), фруктов и т.д. [6].
В этой связи весьма актуальным представляется изучение взаимоотношения сертифицированных пробиотических микроорганизмов лакто- и бифидо- бактерий с пищевыми волокнами отрубей и биодобавки Рекицен-РД, а также влияния указанных пищевых волокон на выживаемость и размножение лакто- и бифидобактерий.

Цель исследования – изучение колонизирующей способности, выживаемости и размножения лактобактерий и бифидобактерий из коммерческих пре-паратов Лактобактерин и Бифидумбактерин на пищевых волокнах пшеничных отрубей и препарата Рекицен-РД.

Задачи исследования:

– получение стерильных препаратов пищевых волокон пшеничных отрубей и препарата Рекицен-РД для использования в качестве субстрата для инокуляции и выращивания лактобактерий и бифидобактерий;
– выращивание лактобактерий и бифидобактерий на субстратах из пищевых волокон пшеничных отрубей и препарата Рекицен-РД при оптимальных условиях и определение количества жизнеспособных микроорганизмов бактериологическим методом;
– изучение жизнеспособности лактобактерий и бифидобактерий, хранящихся при температуре 5±2 ºС в течение 2 недель на ростовых субстратах – пи- щевых волокнах пшеничных отрубей и препарата Рекицен-РД;
– электронно-микроскопическое изучение биокомплекса «отруби / Реки- цен-РД – лактобактерии (бифидобактерии)».


МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. ОБОРУДОВАНИЕ
В работе использовали коммерческие препараты Лактобактерин (серии
15/6) и Бифидобактерин (серии 315-6), произведенные ФГУП «НПО «Микро- ген», Россия. Видовой состав микроорганизмов в препарате Лактобактерин L. plantarum 8Р-А3 (возможны L. plantarum 38, L. fermentum 90Т-С4, L. fermentum
39), в препарате Бифидумбактерин B. bifidum № 1 или № 791.
Выращивание лакто- и бифидобактерий, инокулированных в стерильный субстрат (отруби, Рекицен-РД) в чашках Петри, проводили в микроаэрофильных условиях при температуре 37 ºС с использованием системы для анаэробного культивирования (анаэростат) Anaerobic system Mark III-LE003 (Hi Media Laboratories Pvt. Ltd, Мумбаи, Индия) с пакетами газогенераторными Hi Anaero Gas Pacet.
Образцы пищевых волокон пшеничных отрубей и препарата Рекицен-РД ЗАО «Ягодное» подвергали стерилизации кипячением в течение 30 мин.

 

Количество жизнеспособных пробиотических микроорганизмов (КОЕ·мл-1) после инокуляции в субстраты и в процессе выращивания определяли высевом соответствующих десятикратных разведений суспензий биоматери- ала на плотные питательные среды рекомендованного состава [7, 8] в чашках Петри и подсчета выросших колоний бактерий по истечении времени инкуби- рования при температуре 37 ºС.
Изучение ультраструктуры лакто- и бифидобактерий проводили с исполь- зованием электронных микроскопов: сканирующего электронного микроскопа JEOL JSM-6510LV (Япония) и просвечивающего электронного микроскопа JEOL JEM-1200EX (Япония). Для сканирующей электронной микроскопии готовили препараты на покровном стекле, подсушивали на воздухе, фиксировали в этиловом спирте, после чего проводили платиновое напыление; микроскопию осуществляли при следующих контролируемых параметрах: ускоряющее напряжение – 15 кВ, рабочее расстояние – 18 мм, размер фокусного пятна – 30
%, режим вакуума – глубокий вакуум. Для просвечивающей электронной микроскопии суспензии бактерий после пробоподготовки наносили на медную подложку на 200 Mesh, обрабатывали уранилацетатом и просматривали при ускоряющем напряжении 72 кВ.
Статистическую обработку результатов исследований проводили согласно рекомендациям работы [9].


РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Простерилизованные кипячением пищевые волокна пшеничных отрубей и препарата Рекицен-РД в качестве субстрата в асептических условиях выкладывали в чашки Петри с крышками. Регидратированные пробиотики Лактобактерин и Бифидумбактерин инокулировали в чашки Петри с субстратом. Конечная концентрация лактобактерий составила 1·108 КОЕ·мл-1, а бифидобактерий –
1·106 КОЕ·мл-1. Закрытые крышками чашки Петри с субстратом и инокулированными пробиотическими бактериями инкубировали в микроаэрофильных условиях в течение 24 часов при температуре 37 ºС. По завершении времени инкубирования определяли количество жизнеспособных лакто- и бифидобактерий. Результаты экспериментов приведены на рисунках 1-3 и в таблице

image002

1 2 3

image003

 

4 5 6

Верхний ряд – чашки Петри: с отрубями (1); с отрубями и лактобак- териями (2); с отрубями и бифидобактериями (3).
Нижний ряд – чашки Петри: с Рекиценом-РД (4); с Рекиценом-РД и лактобактериями (5); с Рекиценом-РД и бифидобактериями (6)
Рисунок 1 – Внешний вид чашек Петри с субстратом и инокулированными пробиотическими микроорганизмами

image003

1 2 3

В чашках Петри: 1 – отруби; 2 – отруби с лактобактериями;
3 – отруби с бифидобактериями
Рисунок 2 – Размножение лактобактерий и бифидобактерий на пищевых волокнах пшеничных отрубей

 image004

1 2 3

В чашках Петри: 1 – Рекицен-РД; 2 – Рекицен-РД с лактобактериями;
3 – Рекицен-РД с бифидобактериями
Рисунок 3 – Размножение лактобактерий и бифидобактерий на пищевых волокнах Рекицена-РД

 

Таблица – Колонизация и размножение пробиотических микроорганизмов, инокулированных в пшеничные отруби и Рекицен-РД

Название препа- рата, штамм ми- кроорганизма

Содержание бактерий, инокулированных в субстрат …, на … час

эксперимента, КОЕ·мл-1 ( Х±I95 )

Название препа- рата, штамм ми- кроорганизма

пшеничные отруби

Рекицен-РД

Название препа- рата, штамм ми- кроорганизма

0

24

0

24

Лактобактерин, L. plantarum 8Р-А3

(38), L. plantarum

90Т-С4 (39)

(1,1±0,4)·108

(1,8±0,6)·109

(1,0±0,3)·108

(7,8±0,6)·109

Бифидумбактерин,

B. bifidum № 1 (№ 791)

(1,0±0,3)·106

(2,6±0,7)·109

(1,0±0,3)·106

(9,6±0,8)·109

 

image005image006image007

1 ( 500) 2 ( 1100) 3 ( 3000)

image008image009image010

4 ( 550) 5 ( 7500) 6 ( 4500)
1 – пшеничные отруби; 2 – лактобактерии и пшеничные отруби;
3 – бифидобактерии и пшеничные отруби; 4 – Рекицен-РД;
5 – лактобактерии и Рекицен-РД; 6 – бифидобактерии и Рекицен-РД
Рисунок 4 – Электронно-микроскопическая картина пищевых волокон пшеничных отрубей и Рекицена-РД и растущих пробиотических микроорганизмов (сканирующая электронная микроскопия, платиновое напыление)

 

Представленные на рисунках 1-3 и в таблице данные свидетельствуют о том, что и пшеничные отруби и Рекицен-РД являются не только субстратом для колонизации лактобактерий и бифидобактерий, но и стимулятором роста и размножения пробиотических микроорганизмов. На рисунках 2 и 3 видно, что добавление к субстрату (отрубям и Рекицену-РД) лактобактерий и бифидобакте- рий в созданных оптимальных условиях роста ведет к колонизации и обраста- нию субстрата. Это можно рассматривать с экологической точки зрения как своеобразную «первичную сукцессию», т.е. развитие и размножение биологи- ческого вида на незаселенной ранее территории. При этом, исходя из данных таблицы следует, что ферментированные пищевые волокна Рекицена-РД являются более предпочтительными для роста и размножения лактобактерий и бифидобактерий в сравнении с пищевыми волокнами пшеничных отрубей. И второе, на что обращают внимание данные таблицы, это более интенсивный рост бактерий на ферментированных пищевых волокнах Рекицена-РД, чем на пищевых волокнах пшеничных отрубей: лактобактерий в 4,9 раз, бифидобакте- рий – в 3,7 раз.
Электронно-микроскопическое изучение микробных клеток, выросших на пищевых волокнах пшеничных отрубей и Рекицена-РД, с использованием сканирующей микроскопии с платиновым напылением свидетельствует о сохранении морфологии бактериями: лактобактерии – ровные прямые палочки; бифидобактерии – полиморфные палочки; размеры клеток укладываются в раз- меры, приведенные в руководстве Берджи [10]. Обращает на себя внимание тот факт, что пробиотические микроорганизмы (в большей степени бифидобакте- рии) окружены значительным количеством глобулярных структур (рисунок 4), хорошо видных на электронных микрофотографиях. Очевидно, что их образо- вание – результат метаболической активности растущих микроорганизмов. Продукты метаболизма лактобактерий и бифидобактерий формируют вместе с пищевыми волокнами матрикс, внутри которого находятся бактерии. Именно поэтому при сканирующей электронной микроскопии с платиновым напылением видны поверхностно расположенные микробные клетки, в то время как на- ходящиеся в полужидкой структуре матрикса бактерии не просматриваются.
Следующим этапом работы стало изучение жизнеспособности выросших пробиотических микроорганизмов на ростовых субстратах при хранении чашек Петри в течение 14 дней при температуре (5±2) ºС.
Высев на плотные питательные среды суспензии желеподобного матрикса и подсчет выросших колоний показали наличие примерно того же количе - ства жизнеспособных лактобактерий и бифидобактерий, которое представлено на 24 час роста в таблице. Естественно, что при температуре (5±2) ºС размножения и роста пробиотических микроорганизмов не происходило. В то же время сохранение числа жизнеспособных бактерий, находившихся весь период хране- ния в матриксе, состоящим из пищевых волокон пшеничных отрубей и Рекице - на-РД, жидкости и продуктов метаболизма бактерий, свидетельствует об опре- деленной консервации процесса, в чем можно убедиться из представленных
фотографий на рисунках 5-6.

 image011

1 2 3

В чашках Петри: 1 – отруби; 2 – отруби с лактобактериями;
3 – отруби с бифидобактериями
Рисунок 5 – Лактобактерии и бифидобактерии на пищевых волокнах пшеничных отрубей после хранения в течение 14 дней

image012

1 2 3

В чашках Петри: 1 – Рекицен-РД; 2 – Рекицен-РД с лактобактериями;
3 – Рекицен-РД с бифидобактериями
Рисунок 6 – Лактобактерии и бифидобактерии на пищевых волокнах
Рекицена-РД после хранения в течение 14 дней


Как следует из представленных фотографий, колонизация пробиотиче- ских микроорганизмов, в частности бифидобактерий, на пищевых волокнах стала еще более выраженной (рисунки 5, 6), что говорит в пользу сохранения жизнеспособности лактобактерий и бифидобактерий в процессе хранения. Электронная микроскопия (рисунок 7) является важным дополнением в харак- теристике хранившихся на субстратах пробиотических микроорганизмов.

Во- первых, хорошо видны различия в структуре пищевых волокон пшеничных от- рубей и ферментированных пищевых волокон Рекицена-РД. Во-вторых, морфо- логическая однородность микробных клеток и выраженная фрагментация как пищевых волокон пшеничных отрубей, так и ферментированных пищевых во- локон Рекицена-РД, свидетельствуют в пользу того, что фрагментация пище- вых волокон происходила вследствие жизнедеятельности пробиотических ми- кроорганизмов, инокулированных в субстрат – пищевые волокна пшеничных отрубей и препарата Рекицен-РД.

В-третьих, морфология и размер микробных клеток соответствуют таковым, приведенным в руководстве Берджи [10].

В четвертых, в поле зрения, особенно в случае бифидобактерий, просматриваются округлые структурные образования (глобулы или круглые образования с отчет- ливой сердцевиной), которые со всей очевидностью следует отнести к продуктам жизнедеятельности пробиотических микроорганизмов.

image013image014image014
1 2 3

image016image017image018
4 5 6
1 – пшеничные отруби; 2 – лактобактерии и пшеничные отруби;
3 – бифидобактерии и пшеничные отруби; 4 – Рекицен-РД;
5 – лактобактерии и Рекицен-РД; 6 – бифидобактерии и Рекицен-РД
Рисунок 7 – Электронно-микроскопическая картина пищевых волокон пшеничных отрубей и Рекицена-РД и пробиотических микроорганизмов, хра- нившихся в течение 14 дней (просвечивающая электронная микроскопия)

 

Таким образом, полученные экспериментальные данные дают основание полагать существование значительного потенциала исследуемых пищевых волокон, используемого лактобактериями и бифидобактериями для роста и размножения.


ОБОБЩЕНИЕ И ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Пробиотики в свое время вполне обоснованно были включены в схемы
профилактики и лечения дисбиотических нарушений микрофлоры кишечника. Однако, несмотря на довольно многочисленный рынок пробиотиков, предложенных для внедрения в клиническую практику, все еще не удается с их помо- щью решить проблему дисбактериозов. При этом прослеживается явное несоот- ветствие между сложившимся представлением о высокой эффективности про- биотиков и растущим распространением дисбактериозов [4]. Более того, есть данные о том, что применение коммерческих пробиотиков может быть результативным в одних случаях [11], а в других – безрезультатным или вызвать ухудшение микроэкологического статуса [12]. Возможные причины недостаточной эффективности пробиотической коррекции дисбиозов рассмотрены и проанализированы в диссертационной работе Н.А.Глушановой [13]. В последу- ющем лабораторно-клинические исследования позволили сформулировать важ- нейшее положение о необходимости восстановления собственной микрофлоры кишечника с использованием пребиотиков. Доказана эффективность сочетанного курсового приема пробиотиков с пребиотиками [14], к которым относятся пищевые волокна, в частности пищевые волокна пшеничных отрубей и фермен- тированные пищевые волокна пшеничных отрубей, производимые ЗАО «Ягод- ное» под коммерческим названием Рекицен-РД. Начиная с 1995 г., препарат Ре- кицен-РД применяется более чем в 20 лечебных учреждениях России для нор- мализации пищеварения, метаболизма и глубокой очистки организма от шла- ков, является селективным питанием, стимулирующим рост собственной нор- мальной микрофлоры кишечника. Настоящие исследования предприняты с целью более глубокого понимания стимулирующего влияния Рекицена-РД на рост и размножение лактобактерий и бифидобактерий, являющихся представи- телями нормальной микрофлоры кишечника человека. Указанные пробиотиче- ские микроорганизмы на основе которых созданы сертифицированные препара- ты Лактобактерин и Бифидобактерин, были использованы в экспериментах in vitro для оценки их колонизирующей способности и ростовых свойств при ино- куляции в стерилизованный препарат Рекицен-РД и, взятые в качестве контро- ля, стерилизованные пшеничные отруби. Эксперименты показали, что при со- здании оптимальных микроаэрофильных условий лактобактерий и бифидобак- терий колонизируют пищевые волокна пшеничных отрубей и Рекицена-РД, ис- пользуют их в качестве субстрата для роста и размножения. И в последующем, при хранении выросших культур лактобактерий и бифидобактерий вместе с субстратами при температуре (5±2) ºС в течение 14 дней, жизнеспособность пробиотических микроорганизмов сохранилась практически на том же уровне, что и до хранения.
Следует подчеркнуть, что бифидобактерии размножаются более интенсивно на пищевых волокнах пшеничных отрубей и Рекицена-РД, о чем свиде - тельствуют результаты бактериологического определения количества жизне- способных бактерий (КОЕ·мл-1). Это во-первых, а во-вторых, ферментированные пищевые волокна препарата Рекицена-РД являются более предпочтитель- ными в сравнении с пищевыми волокнами пшеничных отрубей для колониза - ции, роста и размножения как лактобактерий, так и бифидобактерий. При этом, как следует из анализа изображений субстратов и микроорганизмов пребиоти- ков, сделанных с помощью сканирующей и просвечивающей электронной ми- кроскопии, происходят изменения структуры пищевых волокон, на которых размножаются лактобактерии и бифидобактерии. Естественно, что эти измене- ния являются следствием жизнедеятельности пробиотических микроорганиз- мов, как и те глобулярные или округлые образования, видимые при электрон- ной микроскопии субстратов с размножающимися пробиотическими микроор- ганизмами. Вполне вероятно, что это продукты жизнедеятельности лактобактерий и бифидобактерий, которые сродни описанным в работе В.М. Бондаренко
[15] антибиотикоподобным или бактериоциноподобным веществам.
Полученные в настоящем исследовании результаты о стимулирующем влиянии пищевых волокон пшеничных отрубей и препарата Рекицен-РД в экс - периментах in vitro на рост и размножение лактобактерий и бифидобактерий вполне сопоставимы с результатами клинических исследований, в которых пре- парат Рекицен-РД прекрасно зарекомендовал себя при лечении дисбактериоза кишечника в качестве эффективного стимулятора роста нормальной микрофло- ры кишечника, в частности лактобактерий и бифидобактерий, а также препарата, обладающего выраженной антитоксической активностью.


ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании полученных результатов были сделаны следующие выводы:
1. Показана эффективность использования пищевых волокон пшеничных
отрубей и препарата Рекицен-РД для колонизации и размножения пробиотических микроорганизмов лактобактерий и бифидобактерий.
2. Пробиотические микроорганизмы лактобактерий и бифидобактерий используют пищевые волокна пшеничных отрубей и препарата Рекицен-РД для роста и размножения микробных популяций. Рекицен-РД является более предпочтительным субстратом, на котором количество жизнеспособных лактобакте- рий выше в 4,9 раз по сравнению с аналогичным показателем, определенным для пшеничных отрубей, а количество жизнеспособных бифидобактерий выше соответственно в 3,7 раз.
3. По данным электронной микроскопии, выросшие на пищевых волокнах пшеничных отрубей и препарата Рекицен-РД лактобактерии и бифидобак- терии сохраняют нативную структуру и по морфологическим параметрам соответствуют размерам микробных клеток эталонных штаммов пробиотических микроорганизмов.

 4. Пищевые волокна пшеничных отрубей и препарата Рекицен-РД, ис- пользованные лактобактериями и бифидобактериями в качестве субстрата, обеспечивают не только колонизацию, рост и размножение пробиотических ми- кроорганизмов, но и сохранение их жизнеспособности в процессе хранения в течение 14 дней при температуре (5±2) ºС.
5. Выявленные с помощью электронной микроскопии изменения структуры пищевых волокон пшеничных отрубей и препарата Рекицен-РД, а также появление глобулярных структур, в большом количестве окружающих микроб- ные клетки, свидетельствуют о проявлении исследуемыми пищевыми волокна- ми пребиотического эффекта in vitro в отношении лактобактерий и бифидобактерий.
6. С учетом полученных экспериментальных данных, представляется необходимым проведение исследований по изучению пребиотического эффекта препарата Рекицен-РД в опытах in vivo по коррекции дисбиотических наруше- ний микрофлоры кишечника экспериментальных животных с антибиоти- ко-ассоциированным дисбактериозом.

 

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. Похиленко В.Д. Пробиотики на основе спорообразующих бактерий и их безопасность / В.Д.Похиленко, В.В.Перелыгин // Химич. и биол. безопас- ность. – 2007. – № 2-3. – С. 20-41.
2. Fuller R. Probiotics and prebiotics: microflora management for improved gut health / R.Fuller, G.R.Gibson // Clin. Microbiol. and Infect. – 1998. – Vol. 4. – P. 477-480.
3. Gibson G.R. Dietary modulation of the human colonic microflora: introdu- cing the concept of prebiotics / G.R.Gibson, M.B.Roberfroid // J.Nutr. – 1995. – Vol.
125. – P. 1401-1412.
4. Малахов Ю.А. Пробиотики и пробиотические продукты в профилакти- ке и лечении наиболее распространенных заболеваний человека / Ю.А. Мала- хов // Матер. Всерос. конф. с междунар. участием 21-23 апреля 1999 г. – М.:
1999. – С. 110.
5. Захаренко С.М. Инфекции, микробиота кишечника человека и метабо- лический синдром / С.М.Захаренко, Ю.А.Фоминых, С.Н.Мехтиев // Эффектив- ная фармакотерапия. Гастроэнтерология. – 2011. – № 3. – С. 14-20.
6. Минушкин О.Н. Дисбактериоз кишечника (понятие, диагностика, принципы лечебной коррекции). Современные возможности пребиотической терапии: учебно-методическое пособие для врачей и курсантов циклов усовер- шенствования врачей / О.Н.Минушкин, А.Д.Ардатская, И.В.Зверев и др. – М.: ФГУ «Учебно-научный медицинский центр» Управления делами Президента Российской Федерации, 2010. – 50 с.
7. Иванов В.П. Совершенствование методов диагностики дисбактериоза толстого кишечника: информационное письмо / В.П.Иванов, А.Г.Бойцов, А.Д.Коваленко и др. – СПб.: Центр госсанэпиднадзора, 2002. – 31 с.
8. Лихачева А.Ю. Современное состояние вопроса таксономии бактерий рода Lactobacillus / А.Ю.Лихачева, В.М.Бондаренко, К.Я.Соколова // Журн. ми- кробиол. – 1992. – № 9-10. – С. 74-78.
9. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических иссле- дованиях / И.П.Ашмарин, А.А.Воробьев. – Л.: Медгиз, 1962. – 280 с.
10. Определитель бактерий Бердже: в 2 т / Под ред. Дж.Хоулта и др. / Пер. с англ. под ред. Г.А.Заварзина. – М.: Мир. – Т. 2. – 368 с.

11. Субботин В.В. Биотехнология пробиотического препарата лактобифа- диола. Его эффективность / В.В.Субботин // Пробиотики и пробиотические про- дукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний че- ловека: Матер. Всерос. конф. с междунар. участием 21-23 апреля 1999 г. – Москва, 1999. – С. 121-122.
12. Зинченко Е.В. Одно из направлений создания пробиотических препа- ратов / В.В.Зинченко, К.Н.Груздев // Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека: Матер. Всерос. конф. с междунар. участием 21-23 апреля 1999 г. – Москва,
1999. – С. 109-110.
13. Глушанова Н.А. Экспериментальное обоснование новых подходов к коррекции микробиоценоза кишечника: дис. … докт. мед. наук: защищена в
2006 г. / Н.А.Глушанова. – М.: ФГУН «Московский науч.-исслед. ин-т эпидем. и микробиол. им. Г.Н.Габричевского», 2009. – 260 с.
14. Грачева Н.М. Сравнительная оценка клинико-лабораторной эффек- тивности современных про- и пребиотических препаратов в коррекции дисбио- тических нарушений желудочно-кишечного тракта: отчет о клинико-лаборатор- ном исследовании / Н.М.Грачева, М.Д.Ардатская, А.А.Аваков. – М.: ФГУН
«Московский науч.-исслед. ин-т эпидем. и микробиол. им. Г.Н.Габричевского»,
2010. – 23 с.
15. Бондаренко В.М. Прикладные аспекты молекулярной биологии бифи- добактерий и лактобацилл / В.М.Бондаренко // Журн. микробиол. – 2006. – № 7.
– С. 89-97.
Ответственный исполнитель,
доктор медицинских наук, профессор image019

Добавить комментарий


Защитный код
Обновить